Open Access

Gabrielle Travers-Podmaniczky

• Die kongenitale HCMV-Infektion ist der wichtigste Auslöser geistiger Retardierung viraler Genese und ist für die meisten neurosensorischen Hörstörungen nicht genetischen Ursprunges verantwortlich. Die Entwicklung neuer Strategien zur Prävention der HCMV-Infektion bei Neugeborenen ist also von höchster Dringlichkeit. Die Einführung von universellen Screeningprogrammen bei Neugeborenen könnte die frühzeitige Erkennung einer Infektion und somit einen frühen therapeutischen Einsatz ermöglichen. Um dies in die Praxis umsetzen zu können, wird jedoch eine Vereinfachung der Probengewinnung und die Entwicklung einer schnellen und sensitiven Nachweismethode benötigt. Die Anwendbarkeit von verschiedenen im Handel für DNA-Analysen angebotenen Filterpapieren zur Sammlung von Urinproben für die HCMV-Diagnostik mittels PCR wurde untersucht und mit Referenzmethoden verglichen. Es wurden zwei mit Reagenzien behandelten Papiere, das Indicating FTA® Classic Card (Ind FTA Filterpapier) und das FTA® Elute (FTA Elute Filterpapier) und ein unbeschichtetes Papier, das 903® Specimen Collection Paper (903-Filterpapier) eingesetzt. Insgesamt waren alle Papiere leicht einzusetzen, gut verträglich und die Gewinnung von Proben gestaltete sich problemlos. Dilutionsreihen aus Zellkulturüberstand aus einer mit dem HCMV-Laborstamm AD169 infizierten Fibroblastenkultur wurden zur Sensitivitätsbestimmung der Methode eingesetzt. Während bei der Anwendung der Indicating FTA® Classic Cards die Nachweisgrenze der Methode bei 4.000 Kopien/ml lag, wurden beim FTA® Elute- und 903® Specimen Collection-Paper noch Proben mit 400 Kopien/ml erfasst. Ferner wurden 70 klinische Proben mittels Ind. FTA-Papier getestet und 10 mittels FTA Elute- und 903-Filterpapier. Die Sensitivität der Methode betrug im Vergleich zum "Shell Vial Assay" 43,2% beim Einsatz des Ind. FTA-, 60% beim 903- und 70% beim FTA Elute-Filterpapiers. Im Vergleich zur PCR aus mit Qiagen isoliertem Urin erreichte die Methode eine Sensitivität von jeweils 58,3% mit Ind. FTA-, 50% mit dem 903-, und 83,3% mit FTA Elute-Filterpapier. Eine Korrelation zwischen Viruslast in der Filterpapier-Probe und in der mit Qiagen isolierten Urinprobe bestand nur beim FTA Elute Filterpapier. Der Nachweis von HCMV-DNA aus auf FTA Elute-Filterpapier getrockneten Urinproben scheint ein vielversprechender Ansatz in der HCMV-Diagnostik zu sein. Um diese Methode für epidemiologische und/oder diagnostische Zwecke empfehlen zu können, müssten noch umfangreichere klinische Studien durchgeführt werden.
• Congenital HCMV infection is still a major cause of sensorineural hearing loss and mental retardation. Therefore, new intervention strategies for the prevention of HCMV infection are required. Universal screening programs would make an early therapy and an accurate monitoring possible. However, for the introduction of a neonatal screening program, simplification of collection protocols, sample processing techniques together with the development of rapid and sensitive tests are needed. We evaluated the usefulness of urine samples collected on filter paper for detecting HCMV by PCR and compared the sensitivity of the assay with reference methods. We used two chemically treated filter papers, the Indicating FTA® Classic Card (Ind. FTA-Paper) and the FTA Elute paper, and a filter paper without additives, the 903 Specimen Collection Paper (903-Paper). Sample collection, shipping and processing were very simple and rapid. Serial dilutions of supernatant prepared from human fibroblasts infected with HCMV AD 169 where used to evaluate the sensitivity of the assay. Using Ind. FTA paper the detection threshold of the test was 4,000 copies/ ml; the assay reached a sensitivity of 400 copies/ml using FTA Elute and 903 Paper. The sensitivity of the filter paper assay compared with virus isolation was 43,2% using Ind. FTA-Paper, 60% using 903-Paper and 70% using FTA Elute-Paper. Sensitivity of our assay was 58,3% for Ind. FTA paper, 50% with 903 paper and 83,3% with FTA Elute paper compared with PCR using urine samples extracted with Qiagen. Correlation between the viral load in urine sample and the corresponding filter paper sample was found only using FTA Elute paper. The detection of HCMV DNA in urine samples collected on FTA Elute Filterpaper seems to be a promising option for detecting congenital HCMV Infection. However, before widespread use of the methodology for screening and/or epidemiological studies, optimisation of the sensitivity of the assay and wider clinical studies are needed.