Open Access

Levent Fidan

• Die Entdeckung zellfreier fetaler DNA im maternalen Plasma führte in der noninvasiven Pränataldiagnostik zu neuen Methoden. Dazu gehört die PCR-Testung von cffDNA, die eine verlässliche non-invasive diagnostische Methode für ein antenatales Screening von Rh-negativen Schwangeren bietet. Die Ergebnisse dieser Studie zeigen, dass anhand einer automatisierten Extraktion fetaler DNA - in Verbindung mit einer PCR - eine zuverlässige Vorhersage des fetalen Rhesus-Faktors bzw. Geschlechts möglich ist. Dies wurde durch die Untersuchung von 25 Rh-negativen Schwangeren verifiziert. Mit der FACS™-Methode, die als Alternative bei der Bestimmung des Rh-Faktors untersucht wurde, konnten - aufgrund der unspezifischen Bindung des FITC-Antikörpers - keine hinreichenden Ergebnisse erzielt werden. Anhand des verwendeten Extraktionsautomaten (chemagic® MSM I) konnte mit hoher Effizienz fetale DNA isoliert werden. Die untersuchten manuellen Extraktionsverfahren hingegen erwiesen sich für einen antenatalen Massentest bzw. die Implementierung in die klinische Routine als eher ungeeignet, da diese zum einen mit einem erhöhten Zeitaufwand verbunden waren, und zum anderen die isolierte Menge an cffDNA für eine PCR-Testung nicht ausreichte. Die Anzahl der maternalen Plasmaproben, die in dieser Arbeit untersucht wurden, reicht nicht aus um zu belegen, dass die untersuchten Methoden die gleiche Sicherheit bieten, wie die generelle Immunprophylaxe. Daher sind weitere groß angelegte Feldstudien notwendig.
• The discovery of cell-free fetal DNA in maternal Plasma led to new methods in noninvasive prenatal diagnosis. PCR testing of cffDNA is one of these and represents a reliable and non-invasive diagnostic tool for antenatal screening of RhD negative pregnant women. The results of this study demonstrate that, using an automated extraction in combination with PCR, it is possible to make a dependable prediction of fetal Rhesus factor and sex, respectively. This could be confirmed by analysis of 25 RhD negative pregnant women. In determination of the Rhesus factor, the FACS™ method was used as an alternative. Sufficient results could not be reached though due to unspecific binding of FITC antibodies. By using an automated extraction method (chemagic® MSM I) fetal DNA could be isolated with a high efficiency. However, manual DNA-isolation methods tested in this study turned out to be unsuitable for mass testing antenatally as well as for implementation in clinical routine. On the one hand this kind of extraction was time consuming, on the other hand the isolated yield of cffDNA was not enough for PCR testing. The number of maternal plasma samples examined in this study is too small in order to prove, whether the studied methods are as secure as the general immunoprophylaxis. Therefore more large-scaled studies are needed.