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Lothar Demisch, Peter Gebhart

• Beim homogenen enzymatischen Immunoassay wird als Ausmaß des kompetitiven Proteinbindungsprozesses eine Enzymaktivität gemessen. Es wird gezeigt, daß die Enzymaktivität im Meßintervall nicht konstant ist. Die Extinktionszunahme in Abhängigkeit von der Zeit wird durch Regressionskurven der Form y = a, + b1x + b2x2 beschrieben. Bei Annahme einer linearen Beziehung zwischen und der Meßzeit t ist die Varianz um einen Faktor 10exp3 größer, als wenn ein nicht linearer Zusammenhang zugrunde gelegt wird. Weiterhin wird gezeigt, daß bei Verwendung einer linearen Beziehung zwischen und t die Berücksichtigung einer hinreichend großen Anzahl von Meßpunkten notwendig ist, um genügend kleine Variationskoeffizienten zu erhalten. In der Praxis sollten daher bei der Bestimmung von Antiepileptika mit rechnerunterstützten Auswertverfahren Taktzeiten kleiner als ca. 5 sec. gewählt werden.
• Homogeneous enzymatic Immunoassay is commonly used to measure the enzymatic activity as a monitor of the competitive protein binding process. It is sho wn that the rate of increase of enzymatic activity changes with time over the measurement period. The increase in extinction as a function of time t can be fitted by means of a second order regression curve which has the form y = a, + b1x + b2x2. Assuming only a linear relationship between and t (that is, neglecting the second order term b21 2 ), the variance becomesup to three orders of magnitude higher. In addition, it will be demonstrated that using commercially available equipment with linear regression capabilities, it is necessary to log a rather large number of measuring points in order to obtain sufficiently small variation- coefficients. Therefore, if antiepileptica are determined by means of automatic calculation procedures, time intervals smaller than 5 sec are recommended.