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Die Regulation des Zellzyklus wird durch Phosphorylierung und Dephosphorylierung gesteuert. Schlüsselenzyme sind dabei die Cdk/Cyclin-Komplexe. Für den Eintritt und das Durchlaufen der Mitose von besonderer Bedeutung ist die Polo-like Kinase 1 (Plk1). Zur Aufklärung Mitose-spezifischer Signalwege wurden in dieser Arbeit neue Interaktionspartner der Plk1 gesucht. Die Bedeutung dieser Interaktionen für Zellzyklus und Mitose sollten näher charakterisiert werden. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, daß Plk1 direkt mit humanem Cyclin B1, der regulatorischen Untereinheit des M-phase-promoting-factors (MPF), interagiert. Dabei konnte festgestellt werden, daß Plk1 in der Lage ist, Cyclin B1 innerhalb dessen cytoplasmic retention signals (CRS) am Ser-133 zu phosphorylieren. Ferner konnte gezeigt werden, daß die Phosphorylierung der CRS in einer synergistischen Weise durch Plk1 und MAPK (Erk2) stattfindet. Vorphosphorylierung der CRS durch MAPK an Ser-126 und Ser-128 führt nicht nur zu einer 3-4 fach stärkeren Phosphorylierung durch Plk1, sondern auch zur Entstehung neuer Phosphorylierungs-Stellen für Plk1. Die hier aufgeführten Daten zeigen, daß durch synergistische Phosphorylierung der CRS, an der Plk1 beteiligt ist, der rapide nukleäre Import des Cyclin B1/Cdk1-Komplexes in der Prophase gesteuert wird. Dieser rapide Import in den Kern ist Voraussetzung für die Auflösung der Kernmembran in der Prometaphase. Damit konnte gezeigt werden, daß Plk1 dazu beiträgt, den MPF in den Kern (zu seinen Substraten) zu bringen, um früh-mitotische Ereignisse zu induzieren. Mitotische Kinasen (wie MPF, aber auch MAPK) phosphorylieren ihre Substrate oft an Ser/Thr-Pro-Motiven. Sind diese Motive phosphoryliert (pSer/Thr-Pro), so können sie von Pin1, einer Peptidyl-Prolyl-cis/trans-Isomerase isomerisiert werden. In dieser Arbeit wurde gezeigt, daß Plk1 mit Pin1 interagiert. Dabei bindet Plk1 an die Protein-Interaktionsdomäne (WW-Domäne) von Pin1, ist aber gleichzeitig in der Lage, Pin1 innerhalb seiner katalytischen Domäne (PPIase Domäne) zu phosphorylieren. Es konnte gezeigt werden, daß das Ser-65 in Pin1 eine Phosphorylierungs-Stelle für Plk1 darstellt. Da bekannt war, daß Vortäuschung einer Phosphorylierung an Ser-16 oder Ser-67 die Pin1-Aktivität hemmt, wurde ein ähnlicher Effekt für Ser-65 erwartet. Jedoch führte die Vortäuschung der Phosphorylierung an Ser-65 nicht zu einer Reduktion der PPIase-Aktivität von Pin1. In dieser Arbeit konnte erstmals gezeigt werden, daß Pin1 über das Proteasom abgebaut wird. Die Vortäuschung der Ser-65-Phosphorylierung führt zur Stabilisierung des Pin1-Proteins. Damit ist Plk1 das erste bekannte Enzym, welches Pin1 durch Phosphorylierung stabilisiert.
Background The proto-oncogene pituitary tumor-transforming gene (PTTG) has been shown to be abundantly overexpressed in a large variety of neoplasms likely promoting neo-vascularization and tumor invasiveness. In this study, we investigated a potential role for PTTG mRNA expression as a marker to evaluate the future clinical outcome of patients diagnosed with primary cancer of the head and neck. Methods Tumor samples derived from primary tumors of 89 patients suffering from a squamous cell carcinoma were analyzed for PTTG mRNA-expression and compared to corresponding unaffected tissue. Expression levels were correlated to standard clinico-pathological parameters based on a five year observation period. Results In almost all 89 tumor samples PTTG was found to be overexpressed (median fold increase: 2.1) when compared to the unaffected tissue specimens derived from the same patient. The nodal stage correlated with PTTG transcript levels with significant differences between pN0 (median expression: 1.32) and pN+ (median expression: 2.12; P = 0.016). In patients who developed a tumor recurrence we detected a significantly higher PTTG expression in primary tumors (median expression: 2.63) when compared to patients who did not develop a tumor recurrence (median expression: 1.29; P = 0.009). Since the median expression of PTTG in patients with tumor stage T1/2N0M0 that received surgery alone without tumor recurrence was 0.94 versus 3.82 in patients suffering from a tumor recurrence (P = 0.006), PTTG expression might provide a feasible mean of predicting tumor recurrence. Conclusion Elevated PTTG transcript levels might be used as a prognostic biomarker for future clinical outcome (i.e. recurrence) in primary squamous cell carcinomas of the head and neck, especially in early stages of tumor development.