Biologische Hochschulschriften (Goethe-Universität)
Refine
Year of publication
Document Type
- Doctoral Thesis (847)
- Article (12)
- Part of Periodical (2)
- Bachelor Thesis (1)
- Diploma Thesis (1)
Has Fulltext
- yes (863)
Is part of the Bibliography
- no (863)
Keywords
- Gentherapie (7)
- NMR-Spektroskopie (6)
- gene therapy (6)
- Elektrophysiologie (5)
- Molekularbiologie (5)
- RNA (5)
- Schmerz (5)
- Apoptosis (4)
- Arzneimitteldesign (4)
- Carotinoide (4)
- Computational chemistry (4)
- Cytochromoxidase (4)
- Docking (4)
- Immunologie (4)
- Inhibition (4)
- Metabolic Engineering (4)
- Mitochondria (4)
- Mitochondrium (4)
- Proteine (4)
- Altern (3)
- Ameisen (3)
- Angiogenese (3)
- Biodiversität (3)
- Biotechnologie (3)
- Cochlea (3)
- DPOAE (3)
- Elektronentransfer (3)
- Evolution (3)
- Genexpression (3)
- Genregulation (3)
- HIV (3)
- Heterologe Genexpression (3)
- Krebs (Medizin) (3)
- Membranprotein (3)
- Mongolische Rennmaus (3)
- Paracoccus denitrificans (3)
- Photosynthese (3)
- Phylogenie (3)
- Proteinfaltung (3)
- RNS (3)
- Saccharomyces cerevisiae (3)
- Screening (3)
- Signaltransduktion (3)
- Strukturaufklärung (3)
- Transkriptionsfaktor (3)
- Virtual Screening (3)
- West Africa (3)
- Westafrika (3)
- Wirkstoff-Rezeptor-Bindung (3)
- Yarrowia lipolytica (3)
- Zellkultur (3)
- Zellzyklus (3)
- angiogenesis (3)
- apoptosis (3)
- cell cycle (3)
- microRNA (3)
- vasculogenesis (3)
- zebrafish (3)
- 5-Lipoxygenase (2)
- Allergie (2)
- Apoptose (2)
- Aptamer (2)
- Archaea (2)
- Archaebakterien (2)
- Arzneimittel (2)
- Belize (2)
- Biochemie (2)
- Bioinformatik (2)
- Biomarker (2)
- Biomechanik (2)
- Biosynthese (2)
- Brustkrebs (2)
- C. elegans (2)
- Chemie und Pharmazie (2)
- Drug Design (2)
- Drug design (2)
- Eisenzeit (2)
- Electron transfer (2)
- Electrophysiology (2)
- Elektronenmikroskopie (2)
- Endothelin (2)
- Entzündung (2)
- Enzym (2)
- Epigenetik (2)
- Fluoreszenz (2)
- Frankfurt <Main> / Universität / Fachbereich Biochemie (2)
- G-Protein gekoppelte Rezeptoren (2)
- G-Protein-gekoppelter Rezeptor (2)
- GPCR (2)
- Genome (2)
- Gentransfer (2)
- Guanylatcyclase (2)
- Hitzeschock-Proteine (2)
- Hitzestress (2)
- Hyperalgesie (2)
- Hören (2)
- Hörrinde (2)
- In silico-Methode (2)
- Iron Age (2)
- Ischämie (2)
- Kaliumkanal (2)
- Kinetik (2)
- Konformationsänderung (2)
- Lentiviren (2)
- Licht-Sammel-Komplex (2)
- Ligand (2)
- MHC Klasse I (2)
- Magnetische Kernresonanz (2)
- Melatonin (2)
- Membranproteine (2)
- Messung (2)
- Methanbakterien (2)
- Mikroplastik (2)
- Mittelhirn (2)
- Molekulardesign (2)
- Molekulardynamik (2)
- Molekulare Bioinformatik (2)
- Molekülstruktur (2)
- NADH-Dehydrogenase <Ubichinon> (2)
- NADH:ubiquinone oxidoreductase (2)
- NMR (2)
- NMR spectroscopy (2)
- Neuronal Differentiation (2)
- Neuronales Netz (2)
- Onkologie (2)
- Pflanzenstress (2)
- Photolabile Schutzgruppen (2)
- Pichia pastoris (2)
- Plant stress (2)
- Proteomanalyse (2)
- Protonentransfer (2)
- Retrotransposition (2)
- Rotkehlchen (2)
- Schmerzforschung (2)
- Schülerlabor (2)
- Small RNA (2)
- Spektroskopie (2)
- Stress (2)
- Systematik (2)
- Südostasien (2)
- Thermus thermophilus (2)
- Tierphysiologie (2)
- Translokation (2)
- Tropischer Regenwald (2)
- Ubihydrochinon-Cytochrom-c-Reductase (2)
- Umweltfaktor (2)
- Verbreitung (2)
- Verhalten (2)
- Verhaltensbiologie (2)
- Virtuelles Screening (2)
- Wirkstoffdesign (2)
- Xenorhabdus (2)
- Yeast-Two-Hybrid-System (2)
- Zellskelett (2)
- ageing (2)
- auditory cortex (2)
- caging (2)
- conservation (2)
- endothelial cell (2)
- endothelium (2)
- extracellular matrix (2)
- fungi (2)
- gene expression (2)
- hearing (2)
- immunology (2)
- inflammation (2)
- microtubule-targeting agents (2)
- mitochondria (2)
- molecular biology (2)
- mongolian gerbil (2)
- photolabile Schutzgruppe (2)
- sRNA (2)
- transcription factors (2)
- vascular endothelial cells (2)
- virtual screening (2)
- yeast (2)
- Ökotoxikologie (2)
- 19F NMR shifts for fluoroarenes (1)
- 2-Hydroxylase (1)
- 2-Photonen (1)
- 2-hydroxylase (1)
- 3-alkylphenols (1)
- 5-lipoxygenase (1)
- 6-methylsalicylic acid synthase (1)
- A-Typ-ATPasen (1)
- A1AO ATPase (1)
- ABC-Transporter (1)
- ADAM10 (1)
- ADAM15 (1)
- ADAMTS-13 (1)
- AF4 (1)
- AFLPs (1)
- ALE (1)
- ATP-Binding Cassette Transporter (ABC) (1)
- AVA (1)
- Absorptionsspektroskopie (1)
- Acetogenic bacteria (1)
- Acetylcholin (1)
- Actin-bindende Proteine (1)
- Acylimin Sulfonylimin (1)
- Adaptation (1)
- Adenom (1)
- Adrenodoxine (1)
- Aedes albopictus (1)
- Agapetes (1)
- Ageing (1)
- Agelas (1)
- Aktives Zentrum (1)
- Aktuelle Motivation (1)
- Akute lymphatische Leukämie (1)
- Aldosteron (1)
- Aldosteronantagonist (1)
- Alignment <Biochemie> (1)
- Alkaloide (1)
- Allergy (1)
- Allosterischer Effektor (1)
- Alzheimer's disease (1)
- Alzheimer-Krankheit (1)
- Ameisenpflanzen (1)
- Aminobuttersäure <gamma-> (1)
- Aminosäurensequenz (1)
- Amphisphaeriales (1)
- Amplitudenmodulation (1)
- Amyloid (1)
- Anabolismus (1)
- Ananasgewächse (1)
- Angewandte Botanik (1)
- Angiogenesis (1)
- Animal Behavior (1)
- Anisotropy (1)
- Anpassung (1)
- Anthrakologie (1)
- Anthropologie (1)
- Anthropometrie (1)
- Antikörperdetektion (1)
- Antisense-Oligonucleotide (1)
- Aphanomyces astaci (1)
- Apolipoprotein E (1)
- Aptamere (1)
- Aquatisches Ökosystem (1)
- Archäobotanik (1)
- Aromatase (1)
- Artbildung (1)
- Artensterben (1)
- Artificial kidney (1)
- Arzneimittel / Zulassung (1)
- Arzneimittelanalogon (1)
- Arzneimittelprüfung (1)
- Ascidien (1)
- Asian Tiger Mosquito (1)
- Asiatische Tigermücke (1)
- Assembly (1)
- Ataxin-2 (1)
- Atmungskette (1)
- Atoll (1)
- Aufreinigung (1)
- Ausbreitung (1)
- Autism Spectrum Disorder (1)
- Autoproteolyse (1)
- Außerschulisches Lernen (1)
- Axoninitialsegment (1)
- Azide (1)
- B-Lymphozyt (1)
- B-Zell-Lymphom (1)
- BH3 mimetics (1)
- BH3-Mimetika (1)
- BMI (1)
- BRG1 (1)
- Baculovirussystem (1)
- Baleen whales (1)
- Bartonella henselae (1)
- Batten disease (1)
- Bayes-Lernen (1)
- Bildungswahrscheinlichkeit (1)
- Bindestelle (1)
- Bioakkumulation (1)
- Bioartificial kidney (1)
- Bioassay-guided fractionation (1)
- Biochemische Analyse (1)
- Biochemistry (1)
- Biodiversity (1)
- Bioenergetik (1)
- Biogeographie (1)
- Biogeography (1)
- Biokonzentration (1)
- Biologie (1)
- Biologische Uhr (1)
- Biomagnifikation (1)
- Biomolekül (1)
- Biophysical Chemistry (1)
- Biotechnologische Industrie (1)
- Biotechnology (1)
- Biotest (1)
- Biotic interactions (1)
- Bivalven-Vergesellschaftung (1)
- Black Lipid Membrane (1)
- Blech- und Metallwarenindustrie (1)
- Blitzlicht (1)
- Blitzlicht-Photolyse (1)
- Blood-Brain Barrier (1)
- Blut (1)
- Blut-Hirn-Schranke (1)
- Blutgefäßsystem (1)
- Bodycomposition (1)
- Bodyfat (1)
- Borrelia burgdorferi (1)
- Boswelliasäuren (1)
- Bovidae (1)
- Bovines Herpesvirus 1 (1)
- Breast Cancer (1)
- Breast cancer (1)
- Bremsen (1)
- Brevibacterium flavum (1)
- Brevibacterium linens (1)
- Brieftaube ; Orientierungsverhalten ; Flugdatenregistriergerät ; GPS <Satellitengeodäsie> (1)
- Broken symmetry (1)
- Bromeliaceae (1)
- Bungarus (1)
- Bungarus niger (1)
- Bungarus walli (1)
- Burkina Faso (1)
- C peptide (1)
- C-Peptid (1)
- CDK1 Kinase (1)
- CHO (1)
- CIDNP (1)
- CLPXP-Protease (1)
- CNGA3 (1)
- CNGB1 (1)
- CNV 16p11.2 (1)
- CRASP-Proteine (1)
- CRISPR/Cas9 (1)
- CSOs (1)
- Cadherine ; Proteine ; Struktur-Aktivitäts-Beziehung (1)
- Caenohalictini (1)
- Caenorhabditis elegans (1)
- Calcium activated potassium channels (1)
- Calcium-aktivierte (1)
- Calmodulin (1)
- Candida albicans ; Antimykotikum (1)
- Capoeta damascina (1)
- Capsaicin (1)
- Carbendazim (1)
- Carbon capture (1)
- Carcinogenese (1)
- Cardiac regeneration (1)
- Cardiovascular disease (1)
- Caribbean (1)
- Carnivora (1)
- Carotinoidbiosynthese (1)
- Caspase-8 (1)
- Cell-free Protein Synthesis (1)
- Cellular suicide switch (1)
- Central Nervous System (1)
- Cerebral cortex (1)
- Chagas (1)
- Chalydomonas (1)
- Channel Protein (1)
- Channelrhodopsin (1)
- Cheminformatics (1)
- Cheminformatik (1)
- Chemische Verschiebung (1)
- Chemische Ökologie (1)
- Chinchilla (1)
- Chinese hamster ovary (1)
- Chinoloxidase ba3 (1)
- Chironomus riparius (1)
- Chlamydomonas (1)
- Chlor (1)
- Chlorophyll Fluorescence (1)
- Chrimson (1)
- Chromatin (1)
- Chronischer Schmerz (1)
- Chronobiologie (1)
- Chronobiology (1)
- Cicer arietinum (1)
- Cladocera (1)
- Clathrin-vermittelte Endozytose (1)
- Climate (1)
- Climate Change (1)
- Climate change (1)
- Clock genes (1)
- Cluster-Analyse (1)
- Coccoidea (1)
- Coenzym (1)
- Cofaktor (1)
- Coiled coil (1)
- Colorectal Cancer (1)
- Columba livia (1)
- Connectomics (1)
- Conservation (1)
- Copper (1)
- Corbicula (1)
- Coronaries (1)
- Cortisol im Speichel (1)
- Cryptochrom (1)
- Crystallography (1)
- Ctenidae (1)
- Culicidae (1)
- Cupiennius salei (1)
- Curcumin (1)
- Cyclo-AMP (1)
- Cyclo-GMP (1)
- Cyclooxygenase-2 (1)
- Cyclooxygenasen (1)
- Cyprinidae (1)
- Cytochrom c Oxidase (1)
- Cytochrome c Oxidase (1)
- Cytochrome c oxidase (1)
- Cytomegalievirus (1)
- Cytoplasmatische Vererbung (1)
- DASPMI (1)
- DFT (1)
- DIRAS2 (1)
- DNA Methylation (1)
- DNA-Methylierung (1)
- DNA-binding region (1)
- DNS-Sequenz (1)
- DNS-Sonde (1)
- DNS-Synthese (1)
- DR5 (1)
- Daboia russelii (1)
- Daphnia (1)
- Datenbank (1)
- De novo Design (1)
- De-Novo-Synthese (1)
- Death-receptor (1)
- Decapping (1)
- Degeneration (1)
- Delaunay-Triangulierung (1)
- Deoxymannojirimycin (1)
- Depolymerisierung (1)
- Deskriptor (1)
- Detergenz (1)
- Deterministische Optimierung (1)
- Deutschland / Abwasserverordnung (1)
- Development (1)
- Developmental Biology (1)
- Diadinoxanthin (1)
- Dictyostelium discoideum (1)
- Didaktik Neurowissenschaften (1)
- Differentielle Genexpression (1)
- Digitalisierung (1)
- Dimensionsreduktion (1)
- Dipol (1)
- Direkteinleiter (1)
- Dispersal (1)
- Diversität (1)
- Docking protein (1)
- Dolastatinderivate ; Konformationsanalyse ; Tubuline ; Proteinbindung ; NMR-Spektroskopie ; Hammerkopf-Ribozym ; Übergangszustand ; Phospholamban (1)
- Domatien (1)
- Dominanzspektrum (1)
- Dornapparat (1)
- Dreidimensionale NMR-Spektroskopie (1)
- Dreidimensionale geometrische Modellierung (1)
- Drought (1)
- Druckerzeugungsmechanismen (1)
- Drug Delivery (1)
- Drug Targeting (1)
- Druggability (1)
- Dynamik (1)
- EAAT3 (1)
- EAAT4 (1)
- EGFR (1)
- EMCP (1)
- EMSA (1)
- EPR spectroscopy (1)
- Echoorientierung (1)
- Ecology (1)
- Ecotoxicogenomics (1)
- Ecotoxicology (1)
- Ectodomain Shedding (1)
- Efferentes System (1)
- Eintrittsinhibitor (1)
- Einzelpartikelelektronenmikroskopie (1)
- Eisen- (1)
- Eisen-Schwefel-Zentrum N1a (1)
- Electron Paramagnetic Resonance (1)
- Electron microscopy (1)
- Electrospinning (1)
- Elektrisches Remodeling (1)
- Elektrokardiogramm (1)
- Elektronenspinresonanzspektroskopie (1)
- Elektrospray-Ionisation (1)
- Emerging insect model organisms (1)
- Enchytraeidae (1)
- Enchytraeidae-Artengemeinschaft (1)
- Endocrine disrupter (1)
- Endokrin wirksamer Stoff (1)
- Endokrinologie (1)
- Endothel (1)
- Endothelial cell (1)
- Endothelial cells (1)
- Endotheliale Vorläuferzellen (1)
- Endothelin B Rezeptor (1)
- Endothelin Receptor B (1)
- Endothelin-Rezeptor (1)
- Endothelprogenitorzellen (1)
- Endothelzelle (1)
- Endothelzellen (1)
- Endsteinzeit (1)
- Entomologie (1)
- Entomology (1)
- Enzymaktivität (1)
- Enzyme (1)
- Enzymologie (1)
- EphrinB2 (1)
- Eplerenon (1)
- Erdmagnetfeld (1)
- Erdmagnetismus (1)
- Erithacus rubecula (1)
- Ernährungsweise (1)
- Escherichia coli (1)
- Ethnobotanik (1)
- Ethnoökologie (1)
- European Rabbit (1)
- European Robins (1)
- European robin (1)
- Europäisches Wildkaninchen (1)
- Evolutionary developmental biology (1)
- Excitation (1)
- Excitatory balance (1)
- Exozytose (1)
- Export (1)
- Extracellular matrix (1)
- Extrakt (1)
- Extremhabitat (1)
- Exzitation (1)
- Exzitotoxizität (1)
- FCP (Fucoxanthin-Chlorophyll bindende Proteine) (1)
- FCP (Fucoxanthin-Chlorophyll binding Protein) (1)
- FHL-1 (1)
- FRET (1)
- FVIII (1)
- Fabclavine (1)
- Faktor H (1)
- Felsentaube ; Ortsgedächtnis (1)
- Ferroptosis (1)
- Flavobacterium (1)
- Flavobacterium spec P99-3 (1)
- Flavoproteins (1)
- Fledermäuse (1)
- Floristische Kartierung (1)
- Fluorene derivatives (1)
- Fluorescence Lifetime (1)
- Fluorescence labelling (1)
- Fluoreszenz <Motiv> (1)
- Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (1)
- Fluoreszenzmarkierung (1)
- Fluoreszenzspektrometer (1)
- Fluoreszenzspektroskopie (1)
- Fluorid cleavable linker (1)
- Fluorid spaltbarer Linker (1)
- Fluss (1)
- Flussnapfschnecke (1)
- Follikuläre dendritische Zellen (1)
- Foraminiferen (1)
- Force Field Development (1)
- Formvergleich (1)
- Fraßschaden (1)
- Freilandstudie (1)
- Freshwater (1)
- Freshwater Ecosystems (1)
- Fucoxanthin-Chlorophyll-Protein (1)
- Fulani (1)
- Fulbe (1)
- Functional Ecology (1)
- Functional traits (1)
- Funktion (1)
- Fusionsinhibitor (1)
- G-protein coupled receptor (1)
- GABA (1)
- GABA Transporter Typ 1 (1)
- GC-MS (1)
- GEF (1)
- GLUT4 (1)
- GSVs (1)
- Gal2 (1)
- Galakturonsäure (1)
- Gaussian processes (1)
- Gauß Prozesse (1)
- Gehölze (1)
- Gehölzfrüchte (1)
- Gemeinschwämme (1)
- Gene expression (1)
- Gene therapy (1)
- Gene trap (1)
- Genetics (1)
- Genetische Variabilität (1)
- Genfalle (1)
- Genklonierung (1)
- Genom (1)
- Genome engineering (1)
- Gentianinae (1)
- Geoinformationssystem (1)
- Gephyrin (1)
- Gerinnungsfaktor VIII (1)
- Gerontologie (1)
- Giraffe (1)
- Glatter Krallenfrosch (1)
- Glioblastom (1)
- Global Alignment (1)
- Global change (1)
- Glycinrezeptor (1)
- Glykoprotein GP 41 (1)
- Glykoproteine5550 !085487139!{{Chemische Synthese}}; Enzymkatalyse (1)
- Glyzinrezeptor (1)
- Graphentheorie (1)
- Grün fluoreszierendes Protein (1)
- HC-Pro (1)
- HIV infection (1)
- HIV-Infektion (1)
- HPLC (1)
- HRGXE-Motiv (1)
- HWC database (1)
- Habituation (1)
- Halictini (1)
- Halobacterium salinarium (1)
- Halobacterium salinarum (1)
- Haloferax volcanii (1)
- Halophile (1)
- Halophile Bakterien (1)
- Hauptkomponentenanalyse (1)
- Heart (1)
- Hefe (1)
- Hefeartige Pilze (1)
- Helix <alpha-> (1)
- Hematopoetic differentiation (1)
- Hemicellulose (1)
- Herpesvirus (1)
- Hexachlorbenzol (1)
- Hinterhorn <Rückenmark> (1)
- Hinterkiemer (1)
- Hippocampal development (1)
- Hippocampus (1)
- Hirntumor (1)
- Histon-Deacetylierung (1)
- Histone (1)
- Histone Deacetylation (1)
- Histonmodifikationen (1)
- Hodgkin-Lymphom (1)
- Homeobox (1)
- Homeodomänenproteine ; Stat1 (1)
- Homologiemodellierung (1)
- Homöobox (1)
- Honigbiene (1)
- Hydrogen storage (1)
- Hydrogen-dependent CO2 reductase (1)
- Hydrogenasen (1)
- Hydrolasen (1)
- Hämatopoese (1)
- Höhle (1)
- Hörschädigung (1)
- Hörzelle (1)
- IKK epsilon (1)
- IMAC (1)
- Immortalisierung (1)
- Immunadsorption (1)
- Immunkrankheit (1)
- Immunology (1)
- Immunreaktion (1)
- Immunrekonstitution (1)
- Immunseren (1)
- Immunsuppression (1)
- Import (1)
- Indikator (1)
- Indirekteinleiter (1)
- Induced Fit (1)
- Industrieabwasser (1)
- Infectivity (1)
- Infektiösität (1)
- Inflammation (1)
- Influenza (1)
- Inhibitor Binding Pocket (1)
- Inhibitor-binding (1)
- Inhibitorbindetasche (1)
- Inhibitory balance (1)
- Inhibitory interneurons (1)
- Innenohr (1)
- Innovation (1)
- Inquisition post mortem (1)
- Integrale Membranproteine (1)
- Interaktionsanalyse (1)
- Interferon (1)
- Inthraszentin (1)
- Intrazellulärer Transport (1)
- Ionenkanal (1)
- Ionenspezifität (1)
- Ischemia (1)
- Isolierung <Chemie> (1)
- Isopoda (1)
- Isoprenoide (1)
- JAK/STAT-Signalweg (1)
- Java (1)
- Juckreiz (1)
- Juvenile neuronal ceroid lipofuscinosis (1)
- Kalium Kanäle (1)
- Kalmar <Art> ; Diisopropylfluorophosphatase (1)
- Kalziumspeicher (1)
- Kampfsport (1)
- Kanalprotein (1)
- Karate (1)
- Kardiovaskuläres System (1)
- Karibik (1)
- Katabolismus (1)
- Katalase (1)
- Kation ; Organische Verbindungen ; Elektrophysiologie (1)
- Katze (1)
- Kern-Zytoplasma-Transport (1)
- Kernhülle ; Hitzeschock-Proteine ; Proteine ; Wechselwirkung (1)
- Kernpilze (1)
- Ketonkörper (1)
- Kichererbse (1)
- Kieselalgen (1)
- Kinabalu (1)
- Kinematik (1)
- Klassifikation (1)
- Klimarekonstruktion (1)
- Knockout <Molekulargenetik> (1)
- Koaktivatoren (1)
- Kohlenstoffisotop (1)
- Kohlenstoffkreislauf (1)
- Konkurrenz (1)
- Konstitutionstypen (1)
- Kopplungskonstanten (1)
- Korrelation (1)
- Krebsforschung (1)
- Kristallographie (1)
- Kristallzüchtung (1)
- Kronendach (1)
- Kryo-Elektronenkristallographie (1)
- Kryoelektronenmikroskopie (1)
- Kryokonservierung (1)
- Kuala Lumpur <Region> ; Bambus ; Ameisen ; Biozönose (1)
- Kulturlandschaft (1)
- Kupfer (1)
- Kupfer-ATPase (1)
- Kupferstoffwechsel (1)
- Körperfett (1)
- Künstliche Niere (1)
- LINC00607 (1)
- LINE-1 (1)
- LTD (1)
- LTP (1)
- Labyrinth <Anatomie> (1)
- Lactalbumin (1)
- Landschaftsentwicklung (1)
- Landwirtschaft (1)
- Laserin (1)
- Later Stone Age (1)
- Leaf dry matter content (LDMC) (1)
- Lebensmittelallergie (1)
- Lebensweise (1)
- Lebenszykluseffekte (1)
- Lentivirale Vektoren (1)
- Licht (1)
- Lichtabhängigkeit (1)
- Lichtsammelkomplexe (1)
- Ligand (Biochemie) (1)
- Ligand <Biochemie> (1)
- Light sheet-based fluorescence microscopy (1)
- Light-sheet microscopy (1)
- Limonene-3-hydroxylase (1)
- Line Notation (1)
- Lineage Through Time (1)
- Linearisierung (1)
- Linker (1)
- Lipid Environment (1)
- Lipidmembran (1)
- Lipoxygenase <5-> (1)
- Lycopersicon peruvianum ; Hitzestress ; Transkriptionsfaktor ; Proteintransport ; Hitzeschocktranskriptionsfaktor (1)
- Lymphknoten (1)
- Lysosomal storage disease (1)
- Lysosomale Speicherkrankheit (1)
- Lysozym (1)
- M87o (1)
- MALDI (1)
- MCAK (1)
- MD Simulation (1)
- MEA (1)
- MEK inhibition (1)
- MHC (1)
- MICOS complex (1)
- MLL (1)
- Macroevolution (1)
- Macrotermes (1)
- Magnesium (1)
- Magnetkompass (1)
- Magnetkompassorientierung (1)
- Magnetokardiographie (1)
- Magnetperzeption (1)
- Magnetrezeption (1)
- Magnetrezeptormolekül (1)
- Maillard reaction (1)
- Maillard-Reaktion (1)
- Makromolekulare Chemie (1)
- Makromolekül (1)
- Makroreste (1)
- Malaysia (1)
- Malaysia ; Leptogenys ; Schwarmverhalten ; Pheromon ; Verhalten (1)
- Manteltiere (1)
- Markierungsgen (1)
- Marsupials (1)
- Maschinelles Lernen (1)
- Massenspektrometrie (1)
- Maternal Immune Activation (1)
- Maus ; Recombinasen (1)
- Mediale olivo-cochleäre Efferenz (1)
- Mediterranean (1)
- Medizintechnik (1)
- Meerschweinchen (1)
- Mehrdimensionale NMR-Spektroskopie (1)
- Membran (1)
- Membrane Potential (1)
- Membrane Proteins (1)
- Membranfusion (1)
- Membranlipide (1)
- Messenger-RNS ; Translokation ; Peptide ; Wechselwirkung ; Leukämie (1)
- Meta effect (1)
- Metabolon (1)
- Methanogen (1)
- Methanol (1)
- Methylobacterium (1)
- Methyltransferase (1)
- Microarray (1)
- Microbielle rhodopsine (1)
- Microbiology (1)
- Microsatelliten (1)
- Microvesicles (1)
- Migration (1)
- Mikrobiom (1)
- Mikroplastik, Boden, Reifenabrieb, Analytik (1)
- Mikroskopie (1)
- Mikrovesikel (1)
- Milchdrüse (1)
- Milchdrüse ; Entwicklung ; Genregulation (1)
- Milchdrüsengewebe (1)
- Mitochondriale DNS (1)
- Mitochondrien (1)
- Mitose (1)
- Mitteleuropa (1)
- Mittelmeerraum (1)
- Molarenevolution (1)
- Molecular Evolution (1)
- Molecular dynamic simulation (1)
- Molekulare Evolution (1)
- Molekulargenetik (1)
- Moleküldesign (1)
- Moleküldynamiksimulation (1)
- Molekülkomplex (1)
- Monoclonal Antibodies (1)
- Monographie (1)
- Monoklonaler Antikörper (1)
- Monolage (1)
- Monoterpenoid (1)
- Monoterpenoid tolerance (1)
- Monozyklase (1)
- Monozyt (1)
- Morphogenesis (1)
- Morphology (1)
- Moschcowitz-Syndrom (1)
- Motivation (1)
- Motorprotein (1)
- Mulitvariate Statistik (1)
- Multi-domain proteins (1)
- Multielektroden (1)
- Multikomponentenreaktion (1)
- Multiproteinkomplex (1)
- Multispezies-Testsysteme (1)
- Multivariate Modellierung (1)
- Muscheln (1)
- Mutante (1)
- Mutualismus (1)
- MySQL (1)
- Myrmekophytie (1)
- Myxol (1)
- NCoA proteins (1)
- NCoA-Proteine (1)
- NES (1)
- NLS (1)
- NMDA (1)
- NMDA-Antagonist (1)
- NMDA-Rezeptor (1)
- NMR shift calculation (1)
- NMR-Spectroscopy (1)
- NMR-spectroscopy (1)
- Naja (1)
- Nanodiscs (1)
- Nanoparticle (1)
- Nanopartikel (1)
- Nase (1)
- Natriumglutamat <Natrium-L-glutamat> (1)
- Natural Products (1)
- Natural products (1)
- Naturheilkunde (1)
- Naturstoff (1)
- Naturstoffe (1)
- Nekrose (1)
- Neovascularisation (1)
- Neozoen (1)
- Nervensystem (1)
- Nervenzelle (1)
- Nestbau (1)
- Netzhaut (1)
- Neuroanatomie (1)
- Neurodevelopmental Psychiatric Disorders (1)
- Neuronale Differenzierung (1)
- Neuronale Plastizität (1)
- Neurosimulation (1)
- Neurotransmitter-Rezeptor (1)
- Niche (1)
- Nichtsteroidales Antiphlogistikum (1)
- Niere (1)
- Nierentubulus (1)
- Non-canonical terpenes (1)
- Normalkoordinatenanalyse (1)
- Novel Object Test (1)
- Nuclear factor kappa B (1)
- Nucleinsäuren (1)
- Nucleus reuniens (1)
- Nuklearfaktor Kappa B (1)
- Nukleotidzucker (1)
- Nutrient concentration (1)
- OAE (1)
- ORF1 (1)
- Offener Leserahmen (1)
- Ohrenqualle ; Phylogenie ; Sequenzanalyse <Chemie> ; Artbildung ; Tiergeographie (1)
- Ohrenqualle ; Strobilation ; Umweltüberwachung (1)
- Oligonukleotid (1)
- Omp85 (1)
- Omp85-Protein (1)
- Ontogenese (1)
- Oozyten von Xenopus laevis (1)
- Opisthobranchia (1)
- Optical electrophysiology (1)
- Optische Spektroskopie (1)
- Optogenetics (1)
- Optogenetik (1)
- Orexin (1)
- Organic micropollutants (1)
- Organische Synthese (1)
- Organogenese (1)
- Organoids (1)
- Orientation (1)
- Orientierung (1)
- Ortsgedächtnis (1)
- Ortspezifische Mutagenese (1)
- Oxidativer Stress (1)
- Oxoferrylzustand (1)
- Oxygenierung (1)
- P-bodies (1)
- PAM (1)
- PELDOR / DEER (1)
- PGE2 (1)
- PGE2 Cancer Tumorigenesis (1)
- PSGP (1)
- Paarverteilungsfunktion (1)
- Pain (1)
- Palladium-Katalyse (1)
- Pan paniscus (1)
- Papierindustrie (1)
- Paprika ; Desaturasen ; Genexpression ; Paprika (1)
- Paracoccus denitrificans ; Cytochrom c1 (1)
- Paracoccus denitrificans ; Cytochromoxidase ; Protonentransfer ; Elektronentransport (1)
- Parallelverarbeitung (1)
- Parkinson (1)
- Paruroctonus mesaensis (1)
- Patch-Clamp-Methode (1)
- Patch-clamp (1)
- Paul-Ehrlich-Institut (1)
- Peddigrohr (1)
- Peptidbeladungskomplex (1)
- Peptide (1)
- Peptide Loading Complex (PLC) (1)
- Perania nasuta (1)
- Perlhirse (1)
- Permeasen (1)
- Persischer Golf ; Krabben ; Systematik ; Tiergeographie ; Mittelkrebse (1)
- Persönlichkeit (1)
- Pestalotia (1)
- Pestalotiopsis (1)
- Pestizidbelastung (1)
- Pflanzen ; Katalase ; Heterologe Genexpression (1)
- Pflanzenameisen (1)
- Pflanzenfressende Insekten (1)
- Pflanzenhormon (1)
- Pflanzenkartierung (1)
- Pflanzenphysiologie (1)
- Pflanzensoziologie (1)
- Phaeodactylum tricornutum (1)
- Pharmacophore (1)
- Pharmazeutische Chemie (1)
- Pharmazie (1)
- Phasenverschiebung (1)
- Photocages (1)
- Photoisomerization (1)
- Photolabile protecting groups (1)
- Photorhabdus (1)
- Photosynthetisches Reaktionszentrum (1)
- Photosystem I (1)
- Phylogeny (1)
- Phytochrome (1)
- Phytoen (1)
- Pichia ciferrii (1)
- Pigmentproteine (1)
- Pimephales promelas (1)
- Pink1 (1)
- Pinnotheres (1)
- Plant morphological groups (1)
- Plant physiology (1)
- Plant regeneration (1)
- Plant regeneration; community assembly; diversity (1)
- Plants (1)
- Plasmamembran ; Calcium-ATPasen ; Calmodulin ; Peptide ; Wechselwirkung ; Dreidimensionale NMR-Spektroskopie (1)
- Pleistozän (1)
- Podospora anserina (1)
- Poecilia (1)
- Polymere (1)
- Polypeptid transport-associated domains (1)
- Population genetics (1)
- Populationsgenetik (1)
- Positive reinforcement training (1)
- Post-Targeting Funktionen (1)
- Postglaziale Verbreitung (1)
- Posttranslationale Modifikationen (1)
- Potyviren (1)
- PrP (1)
- Prenyl pyrophosphates (1)
- Primär aktive Transporter (1)
- Prion (1)
- Prionprotein (1)
- Processing bodies (1)
- Prognose (1)
- Proliferation (1)
- Promoter (1)
- Promotor (1)
- Promotor <Genetik> (1)
- Prostaglandine (1)
- Prostgandin E Synthasen (1)
- Proteasom (1)
- Proteasomeninhibitoren (1)
- Protein Arginin Methyltransferase (1)
- Protein Structure (1)
- Protein associated with myc (1)
- Protein flexibility (1)
- Protein-Protein Interactions (1)
- Protein-Protein Interaktion (1)
- Protein-Protein-Wechselwirkung (1)
- Protein-Sortierung (1)
- Protein-Tyrosin-Kinase (1)
- Protein-Tyrosin-Phosphatase (1)
- Proteine ; Ligand <Biochemie> ; Wechselwirkung ; NMR-Spektroskopie (1)
- Proteine; Posttranslationale Änderung; Elektrospray-Ionisation; Massenspektrometrie (1)
- Proteinexpression (1)
- Proteinflexibilität (1)
- Proteinregulation (1)
- Proteinsekretion (1)
- Proteintransport (1)
- Proteintyrosinphosphatase (1)
- Proteoliposomen (1)
- Proteomics (1)
- Proteorhodopsin (1)
- Proteostasis (1)
- Proton transfer (1)
- Protonenpumpe (1)
- Pseudomonas (1)
- Pseudomonas putida (1)
- Pseudorezeptoren (1)
- Pseudotypisierung (1)
- Pulmonale Hypertonie (1)
- Puromycin (1)
- Pyramidal neurons (1)
- Pyrrolimidazolalkaloide (1)
- Qinghai-Tibet Plateau (1)
- Quercus (1)
- Quercus frainetto Ten. (Ungarische Eiche) (1)
- Quercus ilex L. (Steineiche) (1)
- Quercus pubescens Willd. (Flaumeiche) (1)
- Quercus robur L. (Stieleiche) (1)
- Quercus rubra L. (Roteiche) (1)
- Quinolinate Phosphoribosyltransferase (1)
- Quinon-Fumarat-Reduktase (1)
- R peptide (1)
- R-Peptid (1)
- RAPDs (1)
- RBFOX1 (1)
- RDCs (1)
- REM-Schlaf (1)
- RNA interference (1)
- RNA-Interferenz (1)
- RNA-folding (1)
- RNS-Bindungsproteine (1)
- RNS-Interferenz (1)
- RUNX1 (1)
- Radical-Pair-Mechanism (1)
- Radikal <Chemie> (1)
- Radikalpaar (1)
- Radikalpaar-Mechanismus (1)
- Radikalpaar-Prozess (1)
- Radioliganden (1)
- Raf <Biochemie> (1)
- Ras (1)
- Reaktionskinetik (1)
- Receptor-based (1)
- Reconstitution (1)
- Regeneration (1)
- Regulation (1)
- Regulation der Genexpression (1)
- Reinigung (1)
- Rekonstitution (1)
- Remote sensing (1)
- Renal tubule (1)
- Renin-Angiotensin-System (1)
- Repetitive DNS (1)
- Reproduction (1)
- Retina (1)
- Retroposon (1)
- Retroviren (1)
- Revision (1)
- Rezeptor (1)
- Rezeptorbasiert (1)
- Rezeptorinternalisierung (1)
- Rheumatoid Arthritis (1)
- Rhinophores (1)
- Rhodnius prolixus (1)
- Rhodopsin (1)
- Rhodopsine (1)
- Ribosomen, rRNA Prozessierung, snoRNA, Ribosomenbiogenesefaktoren (1)
- Ribozym (1)
- Rind (1)
- Risikoanalyse (1)
- Risikomanagement (1)
- Risk assessment (1)
- Rotang-Palme (1)
- Rotoren (1)
- Russell´s Viper (1)
- Ruthenium (1)
- Ruthenium-Laserflash-Spektroskopie (1)
- Rückenmark (1)
- Rückzugsreflex (1)
- SAGE (1)
- SCA2 (1)
- SCO2 (1)
- SILAC (1)
- SIMPrint (1)
- SINE (1)
- SPAD (1)
- SR proteins (1)
- STAT5 (1)
- STAT5-DNA Bindungsstellen (1)
- STM (1)
- Sahel ; Unkraut ; Pflanzensoziologie ; Burkina Faso (1)
- Salt stress (1)
- Salztress (1)
- Sarcophilus (1)
- Sarkoplasmatisches Retikulum ; Calcium ; ATP ; Wechselwirkung (1)
- Sauerstoffisotop (1)
- Sauerstoffradikal (1)
- Savanna (1)
- Scaffold Hopping (1)
- Schadstoffbelastung (1)
- Schallintensität (1)
- Schistosomiaisis (1)
- Schleimpilze (1)
- Schmierläuse (1)
- Schutz (1)
- Schwefelwasserstoff (1)
- SecYEG (1)
- Sediment (1)
- Sehzelle (1)
- Sekretion (1)
- Sekundenherztod (1)
- Sekundärmetabolite (1)
- Sensorrhodopsin (1)
- Septische Granulomatose (1)
- Sequenzierung durch Synthese (1)
- Shapecomparison (1)
- Signal Transduction (1)
- Signaling (1)
- Signalpeptide (1)
- Signalverarbeitung (1)
- Similarity (1)
- Simulation (1)
- Sklerochronologie (1)
- Somatochart (1)
- Somatologie (1)
- Soziobiologie (1)
- Sp1 (1)
- Spatial navigation (1)
- Species distribution modelling (1)
- Sphecodini (1)
- Sphingolipide (1)
- Sphingosin (1)
- Sphingosin-1-Phosphat (1)
- Sphingosinkinase 2 (1)
- Spinach (1)
- Spine (1)
- Spinlabel (1)
- Spironolacton (1)
- Sprung (1)
- Stadtökologie (1)
- Stammzellen (1)
- Stammzelltransplantation (1)
- Stat1 (1)
- Stat3 Gliom Curcumin (1)
- Stechmücken (1)
- Stehendes Gewässer (1)
- Stickstoffmonoxid (1)
- Stofftransport <Biologie> (1)
- Stoffwechsel (1)
- Streptomyces coelicolor (1)
- Stress response (1)
- Stressreaktion (1)
- Structure-based Mutagenesis Study (1)
- Structured Illumination Microscopy (1)
- Struktur (1)
- Struktur-Aktivitäts-Beziehung (1)
- Strukturanalyse (1)
- Strukturbiologie (1)
- Sudden cardiac death (1)
- Sumoylation (1)
- Sumoylierung (1)
- Super resolution (1)
- Super resolution fluorescence microscopy (1)
- SuperSAGE (1)
- Survivin (1)
- Svetamycin (1)
- Symbiont evolution (1)
- Symbiose (1)
- Symbiosis (1)
- Synapse (1)
- Synovial Fibroblast (1)
- Systematics (1)
- Säugetiere ; Melatonin ; Biosynthese ; Regulation (1)
- Südostasien; Macaranga; Bestäubung; Blasenfüße; Mutualismus; Crematogaster; Südostasien; Macaranga; Fortpflanzung; Bestäubung; Blasenfüße; Kastration; Ameisen (1)
- Süßwasser (1)
- T-Lymphozyt (1)
- T-Zell-Leukämie (1)
- T-Zellen (1)
- TAP (1)
- TIGAR (1)
- TKTL1 (1)
- TRAIL (1)
- TRPV1 (1)
- Tabanidae (1)
- Talent (1)
- Talentsuche (1)
- Taphonomie (1)
- Targeted drug delivery (1)
- Taschenoberfläche (1)
- Tasmanian devil (1)
- Tau-Protein (1)
- Taube (1)
- Taunus (1)
- Taxonomie (1)
- Taxonomy (1)
- Technologieakzeptanz (1)
- Telomerase (1)
- Temperatur (1)
- Temperaturabhängigkeit (1)
- Temporäres Gewässer (1)
- Tentakel <Zoologie> (1)
- Terbutryn (1)
- Termiten (1)
- Terpenes (1)
- Terpenoid (1)
- Testosteronreductase <Testosteron-5-alpha-Reductase> (1)
- TetR (1)
- Tetrablemmidae (1)
- Tetramerisation (1)
- Tetrazyklinrepressor (1)
- Thermophile (1)
- Thermophile Bakterien (1)
- Thermoregulation (1)
- Thiosulfat Sulfurtransferase (1)
- Thrombotic thrombocytopenic purpura (1)
- Thrombozyten (1)
- Time-averaging (1)
- Tissue Engineering (1)
- Tocochromanol (1)
- Todesrezeptor (1)
- Tomate (1)
- Tomate ; Hitzestress ; Transkriptionsfaktor (1)
- Tonhöhe (1)
- Torini (1)
- Toxizität (1)
- Transcription (1)
- Transcriptional activity (1)
- Transcriptome (1)
- Transcriptomics (1)
- Transduktion B Zellen (1)
- Transformation (1)
- Transient absorption (1)
- Transkription (1)
- Transkription <Genetik> (1)
- Transkriptionsfaktoren (1)
- Transkriptomanalyse (1)
- Translation <Genetik> (1)
- Translational Psychiatry (1)
- Translocation (1)
- Transplantation (1)
- Transponierbares Element (1)
- Transport (1)
- Transporter associated with antigen processing (TAP) (1)
- Transporter assoziiert mit Antigen-Prozessierung (1)
- Transposon systems (1)
- Triatominae (1)
- Trichoptera (1)
- Trichostatin A (1)
- Tripterospermum (1)
- Trockenstress (1)
- Tropical montane forest (1)
- Truffle (1)
- Trypanosoma cruzi (1)
- Tubastrin (1)
- Tumor (1)
- Tumor necrosis factor alpha (1)
- Tumor-Nekrose-Faktor <alpha> (1)
- Tumorsuppressor-Gen (1)
- Tumorwachstum (1)
- Typ 4 Pilus (1)
- Typ I Interferon Rezeptor (1)
- Tyrosin (1)
- UDP-Glucose-Dehydrogenase (1)
- UDP-glucose dehydrogenase (1)
- UL49.5 (1)
- UV-VIS-Spektroskopie (1)
- UVB (1)
- Ubichinonbindetasche (1)
- Ubiquinon-Cytochrome c-Reductase (1)
- Ubiquinone Binding Pocket (1)
- Ubiquitin Ligase (1)
- Ubiquitin chains (1)
- Ubiquitination (1)
- Uhrengene (1)
- Umweltchemikalie (1)
- Umweltdaten (1)
- Umweltgefährdung (1)
- Umweltgeochemie (1)
- Umweltrisikoabschätzung (1)
- Umwelttoxikologie (1)
- Umweltwahrnehmung (1)
- Unterart; Pollen; Sammeln; Verhalten (1)
- Untranslated Region (1)
- Urban Ecology (1)
- Ustilaginomycotina (1)
- V1 (1)
- VEGF (1)
- VSV (1)
- Vaccinieae (1)
- Vaccinium (1)
- Varicellovirus (1)
- Varizellen-Virus (1)
- Vaskularisation (1)
- Vaskulogenese (1)
- Vegetationsgeschichte (1)
- Verbreitungsökologie (1)
- Verzögerte Fluoreszenz (1)
- Vesikel (1)
- Viral Infection (1)
- Viral entry (1)
- Virologie (1)
- Virtual screening (1)
- Virusinfektion (1)
- Viskoelastizität (1)
- Vitality monitoring (1)
- Vogelzug (1)
- Voltage Clamp (1)
- Voltage Imaging (1)
- Volumenverschiebungen (1)
- Von Willebrand Faktor (1)
- Von Willebrand factor (1)
- Vorhofflimmern (1)
- Voronoi-Diagramm (1)
- Vögel (1)
- W National Park (1)
- WSINE1 (1)
- Wasserflöhe (1)
- Wasserpflanzen (1)
- Wasserstoffionenkonzentration (1)
- Wasserstoffperoxid (1)
- Wechselwirkung (1)
- West Indies (1)
- Western Kenya (1)
- Whole Effluent Assessment (1)
- Wilson Disease Protein (1)
- Wirbellose (1)
- Wirtspflanzen (1)
- X-ray Crystallography (1)
- X-ray crystallography (1)
- Xylose (1)
- Yeast (1)
- YidC (1)
- ZIKV (1)
- ZYMV (1)
- Zahn-Wellens test (1)
- Zahn-Wellens-Test (1)
- Zahnwale (1)
- Zeaxanthin (1)
- Zebrafish (1)
- Zeit-Frequenz-Analyse (1)
- Zeitauflösung (1)
- Zeitverarbeitung (1)
- Zell-basierte Assaysysteme (1)
- Zellaufnahme (1)
- Zelldifferenzierung (1)
- Zelltod (1)
- Zellulares neuronales Netz (1)
- Zellwand (1)
- Zentralnervensystem (1)
- Zirbeldrüse (1)
- Zoologie (1)
- Zugvögel (1)
- Zuwachs (1)
- Zweiphotonen-Anregung (1)
- Zyklisierung (1)
- Zytokinrezeptor (1)
- accessory subunit (1)
- actin (1)
- acyl carrier protein, polyketide synthases, Curacin cluster (1)
- adult neurogenesis (1)
- aggregopathy (1)
- aktuelles Interesse (1)
- akute Toxizität (1)
- aldosterone (1)
- allosterischer Modulator (1)
- alternative splicing (1)
- ant-plants (1)
- anthracology (1)
- anti-inflammatory (1)
- antimicrobial resistance (1)
- aptamer (1)
- arabinose (1)
- archaeobotany (1)
- aroma (1)
- atrial fibrillation (1)
- atrophy (1)
- auditory Midbrain (1)
- autoproteolysis (1)
- bacillary angiomatosis (1)
- bacteria-host interaction (1)
- bacterial infection (1)
- bacterial two hybrid system (1)
- bakterielles Two Hybrid System (1)
- bats (1)
- bc1-complex (1)
- benthic (1)
- benthisch (1)
- bioassay (1)
- biodiversity (1)
- bioenergetics (1)
- bioinformatic (1)
- biomechanics (1)
- birds (1)
- bivalve assemblage (1)
- black lipid membrane (1)
- blood (1)
- boswellic acids (1)
- brain waves (1)
- cAMP (1)
- calcium store (1)
- carotenoid biosynthesis (1)
- caspase-8 (1)
- cell biology (1)
- cell death (1)
- cell migration (1)
- cell targeting (1)
- cell uptake (1)
- cell wall precursor (1)
- cell-based assay-systems (1)
- cell-free (1)
- chemical shifts (1)
- chemical synthesis (1)
- chemistry education (1)
- chronische Toxizität (1)
- cisternal organelle (1)
- climate change (1)
- climate reconstruction (1)
- coactivators (1)
- coagulation factor VIII (1)
- cobra (1)
- cochlear amplifier (1)
- cochleärer Verstärker (1)
- coevolution (1)
- color (1)
- complex of closely related species (1)
- computational chemistry (1)
- conformation (1)
- consortia (1)
- cooperation (1)
- cophylogeny (1)
- cospeciation (1)
- crosslinking-mass spectrometry (1)
- cryo-EM (1)
- cryo-eletron crystallography (1)
- cryptochrome (1)
- cultivation (1)
- cultural landscape (1)
- cyclic nucleotide-gated ion channel (1)
- cyclooxygenase (1)
- cyclooxygenase-2 (1)
- cytochrome c oxidase (1)
- cytokine (1)
- cytokine receptor (1)
- dMM (1)
- de novo design (1)
- depolymersation (1)
- detergent (1)
- development (1)
- diabetes type 1 (1)
- diatom (1)
- differentiation (1)
- display Bibliotek (1)
- display library (1)
- distribution (1)
- diurnal (1)
- diversity (1)
- domatia (1)
- drug design (1)
- drug discovery (1)
- dryland (1)
- dynamics (1)
- ecological genetics (1)
- ecosystem services (1)
- elapid snake (1)
- electrical remodeling (1)
- electron microscopy (1)
- electron transfer (1)
- electrophysiologie (1)
- electrophysiology (1)
- elektrochemisches Protonenpotential (1)
- elephant (1)
- enantioselektive Synthese (1)
- endothelin receptor (1)
- endothial precursor cells (1)
- entry inhibitor (1)
- envenoming (1)
- environmental DNA (1)
- environmental attitudes (1)
- environmental behavior (1)
- environmental education (1)
- environmental knowledge (1)
- environmental perception (1)
- environmental stressors (1)
- enzymatically cleavable Linker (1)
- enzymatisch spaltbarer Linker (1)
- enzyme assay (1)
- enzyme inhibitor (1)
- epigenetic regulation (1)
- ethnobotany (1)
- ethnoecology (1)
- export (1)
- failure to diverge (1)
- feeding habit (1)
- fitness (1)
- flora (1)
- fluorescence (1)
- follicular dendritic cells (1)
- food allergy (1)
- food quality (1)
- frequency-time analysis (1)
- freshwater (1)
- freshwater crayfish (1)
- fucoxanthin-chlorophyll-protein (1)
- full-thickness skin model (1)
- functional (1)
- functional coupling (1)
- fungal phylogeny (1)
- fusion inhibitor (1)
- gamma oscillations (1)
- gen expression (1)
- generation probability (1)
- genetical engineering (1)
- genetransfer (1)
- genotype (1)
- geoecology (1)
- geographic information system (GIS) (1)
- geophytes (1)
- gephyrin (1)
- gerbil (1)
- gerontology (1)
- glatte Gefäßmuskelzellen (1)
- glioma (1)
- glucocorticoid (1)
- glutamate transporter (1)
- glycerophospholipid (1)
- glycine rezeptor (1)
- gp41 (1)
- granule cells (1)
- hGPR63 (1)
- hS1P5-Rezeptor (1)
- habitat heterogeneity (1)
- hair cell (1)
- hearing loss (1)
- heart development (1)
- heat stress (1)
- hematopoietic stem cell (1)
- hemicellulose (1)
- hen egg white lysozyme (1)
- hepatische Ketogenese (1)
- herbivores (1)
- herpesvirus (1)
- heterosynaptic plasticity (1)
- high-content screening (1)
- high-frequency stimulation (1)
- hippo (1)
- hippocampus (1)
- histone modifications (1)
- homeobox (1)
- homeobox A9 (1)
- homeodomain proteins (1)
- host-switch (1)
- human pancreatic organoids (hPOs) (1)
- human-wildlife conflict (1)
- hyperalgesia (1)
- immortalization (1)
- import (1)
- in vivo screen (1)
- indirect discharger (1)
- industrial effluents (1)
- information literacy (1)
- infra-slow oscillation (1)
- inhibition (1)
- integral membrane proteins (1)
- intensity (1)
- intermediate state (1)
- intracellular transport (1)
- intramolecular protein interaction (1)
- intramolekulare Proteininteraktion (1)
- katalytischer Zyklus (1)
- kern-basiertes Lernen (1)
- kernel learning (1)
- kinetics (1)
- konstitutive Aktivität (1)
- krait (1)
- lange Signalpeptide (1)
- lateral line (1)
- left ventricular hypertrophy (1)
- lentiviral vector (1)
- lentiviral vectors (1)
- lentivirale Vektoren (1)
- lentivirale siRNA Transduktion (1)
- lentiviraler Vektor (1)
- leukocyte adhesion (1)
- lichtaktivierbare Nukleinsäure (1)
- life cycle effects (1)
- life habit (1)
- light dependent magnetic compass (1)
- light-harvesting complexes (1)
- lightactivatable nucleic acids (1)
- lipid metabolism (1)
- livelihood (1)
- long non-coding RNA (1)
- long signal peptide (1)
- long-term depression (1)
- long-term potentiation (1)
- mPFC (1)
- mPGES-1 (1)
- mRNA-Abbau (1)
- mRNA-Speicherung (1)
- mTOR (1)
- macrohabitat (1)
- macroremains (1)
- magnetic compass orientation (1)
- magnetic exchange coupling constants (1)
- magnetoreception (1)
- mammary gland tissue (1)
- mapping (1)
- mechanics (1)
- medically relevant (1)
- membrane anchor; substrate-binding protein dependent secondary transport; TRAP-associated extracytoplasmic immunogenic (TAXI); tripartite ATP-independent periplasmic (TRAP) (1)
- membrane fluidity (1)
- membrane fusion (1)
- membrane protein (1)
- metabolism (1)
- metabotroper Glutamatrezeptor (1)
- metabotropic (1)
- metastasis (1)
- miRNA (1)
- miRNS (1)
- microRNA-17-92 cluster (1)
- microRNAs (1)
- microbiome (1)
- microsatellites (1)
- migratory birds (1)
- mitochondrial dysfunction (1)
- mitosis (1)
- mitotic spindle (1)
- modeling (1)
- molecualr phylogeny (1)
- molecular beacons (1)
- molecular phylogenetics (1)
- molecular structure (1)
- monocyclase (1)
- monocytes (1)
- morphological features (1)
- motor protein (1)
- mounting (1)
- mouse (1)
- movement (1)
- mtDNA (1)
- multidimensional nmr spectroscopy (1)
- multielectrode array (1)
- mutants (1)
- mutualism (1)
- myeloid angiogenic cells (1)
- myrmecophytes (1)
- neuromodulation (1)
- neuronal plasticity (1)
- niche evolution (1)
- nicht kodierende RNA (1)
- nicht-native Proteine (1)
- nitric oxide (1)
- nociception (1)
- nomadic (1)
- non coding RNA (1)
- non-native proteins (1)
- non-timber forest products (NTFPs) (1)
- npas4l (1)
- nucleotid-sugars (1)
- olivo-cochlear efferents (1)
- olivo-cochleäre Efferenzen (1)
- ontogenesis (1)
- organische Verbindungen (1)
- organotin compound (1)
- outdoor education (1)
- overtaking innovation (1)
- oxygen radical (1)
- p38 MAPK (1)
- p53 (1)
- p63 (1)
- pH-indicator dye (1)
- parathyroid hormone 2 (1)
- patch-clamp technique (1)
- pearl millet (1)
- peroxisom proliferator aktivierter Rezeptor (1)
- peroxisome proliferator-activated receptor (1)
- pesticide (1)
- photlabile protecting group (1)
- photolabile Schutzgruppen (1)
- photooxidativer Stress (1)
- photoschalbare (1)
- photospaltbare Linker (1)
- pitch (1)
- plant diversification (1)
- plant species diversity (1)
- plant-ants (1)
- platelets (1)
- pocket surface (1)
- polyketide synthase (1)
- potassium channel (1)
- potyvirus (1)
- pre-steady state (1)
- preparative cell-free expression (1)
- problem-based learning (1)
- promoter (1)
- pronephric duct (1)
- propagating waves (1)
- prostaglandin synthases (1)
- proteasomeinhibitors (1)
- protein expression (1)
- protein flexibilty (1)
- protein folding (1)
- protein sorting (1)
- protein-ligand docking (1)
- protein-protein interaction (1)
- proteome (1)
- proteome analysis (1)
- proton transfer (1)
- pseudoreceptors (1)
- pseudotyping (1)
- pulmonary hypertension (1)
- purification (1)
- quantenpunkte (1)
- quantitative proteomics (1)
- radical-pair process (1)
- radioligand (1)
- rat (1)
- rationale Stammentwicklung (1)
- repetitive Tonpulse (1)
- repetitive tone pips (1)
- reptiles (1)
- residual dipolar couplings (1)
- respiratory chain (1)
- retina (1)
- retrotransposition (1)
- retroviral vectors (1)
- retrovirale Vektoren (1)
- retrovirus (1)
- reversible Terminatoren (1)
- reversible terminator (1)
- ribosomes, Arabiodpsis thaliana, pre-rRNA processing, snoRNA, (1)
- rna interference (1)
- sRNA-Bindung (1)
- sRNA-binding (1)
- sage downy mildew (1)
- scFv (1)
- sclerochronology (1)
- scoring function (1)
- secretion (1)
- selbst-anordnende (1)
- sequencing by synthesis (1)
- serine/arginine-rich proteins (1)
- shallow lakes (1)
- shroom (1)
- siRNA (1)
- siderophore-dependent iron uptake (1)
- signal transduction (1)
- simulation (1)
- single particle electron microscopy (1)
- skin equivalent (1)
- sleep (1)
- small RNA (1)
- smooth muscle cell (1)
- smut fungi (1)
- snake bite (1)
- social isolation (1)
- socio-economics (1)
- soluble guanylyl cyclase (1)
- species delimitation (1)
- species distribution modelling (1)
- spheroid (1)
- sphingolipids (1)
- sphingosine (1)
- spinal cord (1)
- spine apparatus (1)
- splicing (1)
- stabile Isotope (1)
- stable isotopes (1)
- stem cells (1)
- stimulus repetition (1)
- stream macroinvertebrates (1)
- structure determination (1)
- structure modeling (1)
- sub-Saharan Africa (1)
- subgenera (1)
- subzelluläre Fraktionierung (1)
- succulents (1)
- sugar uptake (1)
- surround suppression (1)
- survivin (1)
- symbiont association patterns (1)
- synapse (1)
- synaptic plasticity (1)
- synaptic transmission (1)
- synaptic vesicle recycling (1)
- t cell leukemia (1)
- t(4;11) (1)
- targeted cell entry (1)
- tau protein (1)
- taxonomy (1)
- temperature (1)
- termitaria (1)
- time-averaging (1)
- time-processing (1)
- time-resolved absorption spectroscopy (1)
- time-resolved fluorescence (1)
- transcriptome (1)
- transduction B cells (1)
- transglutaminase 2 (1)
- transient absorption (1)
- transiente Absorption (1)
- transkription factor (1)
- transmembran (1)
- tree crops (1)
- trimeric autotransporter adhesin (1)
- trnL-Intron (1)
- trnL-trnF & trnT-trnL Intergenischer Spacer (1)
- tsetse fly (1)
- type I interferon receptor (1)
- tyrosine radical (1)
- unfolded proteins (1)
- unterrichtliche Vor- und Nachbereitung (1)
- varicellovirus (1)
- vegetation (1)
- vegetation history (1)
- venomous snakes (1)
- verwilderte Hauskatzen (1)
- virtuelles Mikroskop (1)
- virtuelles Screening (1)
- woody vegetation (1)
- wwtr1 (1)
- xCGD (1)
- xylose (1)
- yap1 (1)
- zeitaufgelöste Fluoreszenz (1)
- zellfrei (1)
- zellfreie Expression (1)
- zielgerichteter Zelleintritt (1)
- zisternale Organelle (1)
- zonation (1)
- zoogeography (1)
- zyklisch Nukleotid-gesteuerter Ionenkanal (1)
- Ähnlichkeit (1)
- Übertragbarkeit (1)
- ökologische Genetik (1)
Institute
- Biowissenschaften (547)
- Biochemie und Chemie (169)
- Biochemie, Chemie und Pharmazie (78)
- Pharmazie (32)
- Institut für Ökologie, Evolution und Diversität (20)
- Georg-Speyer-Haus (6)
- Medizin (5)
- Geowissenschaften (4)
- Biodiversität und Klima Forschungszentrum (BiK-F) (3)
- Frankfurt Institute for Advanced Studies (FIAS) (3)
Die Ursache von Adipositas liegt im übermäßigen Wachstum von Fettgewebe, welches hauptsächlich aus Fettzellen, den Adipozyten, besteht. Die Zellen der stroma-vaskulären Fraktion, welche Vorläuferzellen, Makrophagen und Zellen des lokalen Gefäßnetzwerks enthält, sind außerdem an der Homöostase des Fettgewebes beteiligt. Insbesondere spielt das Gefäßsystem des Fettgewebes in Nagetieren eine wichtige Rolle im Fettgewebewachstum, da die Hemmung der Angiogenese in genetisch- und diät-induzierten fettleibigen Mäusen die Entstehung von Adipositas verhindert. Dennoch wurde das Gefäßsystem des menschlichen Fettgewebes bis heute nicht erforscht. Durch immuno-histochemische Analysen am subkutanen menschlichen Fettgewebe konnten wir zwei verschiedene Gefäßsysteme identifizieren: das vaskuläre Netzwerk des Bluts und das lymphatische vaskuläre Netzwerk. Während die Endothelzellen von beiden Gefäßsystemen die gemeinsamen Endothelzellmarker von Willebrand factor (vWf) und CD31 (PECAM, Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule) exprimierten, konnten die Endothelzellen der Blutgefäße an der Expression des Markers CD34 (Stamm/Blutgefäß-Endothel-Zell-Marker) und die Endothelzellen der Lymphgefäße an der Expression der beiden lymphatischen Marker Podoplanin und VEGFR3 (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 3) spezifisch erkannt werden. Ausschließlich für den Marker CD34-positive Zellen und in Rosetten angeordnete CD31-positive Zellen, welche als residente Makrophagen wurden auch charakterisiert. Um die beiden Gefäßsystemen des menschlichen Fettgewebes weiterhin zu erforschen, haben wir ein auf Immunoselektion basiertes Protokoll entwickelt. Es ermöglicht, Blut- (BEC) und lymphatische (LEC) Endothelzellen aber auch Makrophagen und CD34-positive Zellen spezifisch zu isolieren. Sowohl BEC als auch LEC exprimierten VEGFR1, VEGFR2, vWf und Notch4 und nehmen acetyliertes LDL auf. Darüber hinaus konnte in LEC die Expression von Genen, welche spezifisch für das Lymphgefäßsystem sind, wie Podoplanin, Reelin, VEGFR3, Desmoplakin, LYVE-1 nachgewiesen werden. Durch fluss-cytometrischen Analysen des Anzahls von BEC und LEC im Fettgewebe von Patienten mit unterschiedlichen Body Mass Indices (BMI) wurde entdeckt, dass Fettleibigkeit von einer Erweiterung des vaskulären Netzwerks des Bluts im Fettgewebe begleitet wird, jedoch nicht von einer Erweiterung des lymphatischen vaskulären Systems. Flusscytometrische Analysen belegen, dass es in der CD34-positive Stroma-Zellpopulation Zellen gibt, die den endothelialen Progenitor-Zellmarker CD133 und den primitiven Stammzellmarker ABCG2 exprimieren. Außerdem zeigten die CD34-positive Zellen eine signifikant stärkere Proliferation und Expression von Endothelzellmarkern wie CD31 und vWf, wenn dem Kulturmedium zuvor die Faktoren Vascular Endothelial Growth Factor A (VEGF A) und Insulin-Like Growth Factor-1 zugefügt worden waren. Wurden Mäusen mit Hinterbeinischämie CD34-positive Zellen in vivo injiziert, beteiligten sich diese Zellen an der Neovaskularisation des ischämischen Hinterbeins. Eine signifikante Zunahme des Blutflusses im ischämischen Bein, gekoppelt an einer erhöhten Kapillardichte im ischämischen Muskel und einer Integration der menschlichen Zellen in die Vaskulatur der Maus waren erkennbar. Diese Ergebnisse weisen darauf hin, dass es unter den CD34-positive Zellen eine Population von endothelialen Progenitorzellen gibt, die -bei geeigneter Stimulation- zu Endothelzellen differenzieren. Parallel dazu wurden die lokalen Faktoren untersucht, die potentiell an der Wachstumskontrolle, der Migration und der Organisation der ruhenden, aus dem Fettgewebe stammenden, BEC und LEC beteiligt waren. Sekrete der Adipozyten, jedoch nicht der CD34-positive Zellen, induzierten eine signifikante BEC- und LEC-Proliferation. Außerdem induzierte die Kombination von Leptin und VEGF A oder des basic Fibroblast Growth Factor eine signifikante Zunahme der BrdU-Inkorporation in BEC während Adiponectin, VEGF C und VEGF D bereits alleine konzentrationsabhängig die Proliferation von LEC induzierten. Leptin, und nicht Adiponectin, führte zu signifikant höherer BEC-Migration und Röhrenformung, während Adiponectin, und nicht Leptin, die LEC-Migration und -Organisation förderte. Dabei führte Leptin in BEC und Adiponectin in LEC zeitabhängig zu einer signifikanten Zunahme der Phosphorylierung der Kinase Akt. Diese Ergebnisse belegen, dass die beiden aus Adipozyten stammenden Adipokine Leptin und Adiponectin eine tragende Rolle in der Umverteilung von BEC bzw. LEC spielen. Im Rahmen der Adipositas steigt die Plasmakonzentration von Leptin an während die Plasmakonzentration von Adiponectin sinkt. Unsere Ergebnisse deuten daraufhin, dass Leptin als lokaler pro-angiogenetischer Faktor identifizieren und Adiponectin als neuer lymphangiogenetischer Faktor im menschlichen Fettgewebe beschreiben konnte. Demnach könnten Veränderungen, in der Adipositas, der Adipokinfreisetzung durch Adipozyten am Umbau des vaskulären Netzwerks des Bluts und am ausbleibenden Wachstum des lymphatischen vaskulären Systems innerhalb des Fettgewebes beteiligt sein. Schließlich belegen die vorliegenden Ergebnisse das Vorhandensein einer Progenitor-Zell-Population in der Stroma-Fraktion des menschlichen Fettgewebes. Diese Progenitor-Zellen sind in der Lage sich an der Neovaskularisation ischämischen Gewebes zu beteiligen. Diese Population könnte im Hinblick auf zelltherapeutische Strategien eine interessante Alternative zu Stammzellen aus dem Knochenmark darstellen.
5-LO is the key enzyme in the biosynthesis of proinflammatory leukotrienes, converting arachidonic acid to 5-HPETE, and in a second step 5-HPETE to leukotriene A4. Although the 5-LO promoter possesses characteristics of so called housekeeping genes, such as lack of TATA/CCAAT boxes and existence of several Sp1 binding sites, the 5 -LO gene is tissue specifically expressed in primarily immune competent cells of myeloid origin including granulocytes, monocytes, macrophages, mast cells and B-lymphocytes. 5-LO gene expression in MM6 and HL-60 cells is strongly induced after differentiation of the cells with TGF-beta and 1,25(OH)2D3. In some monocytic cancer cell lines, such as HL-60 TB and U937, TGF-beta and 1,25(OH)2D3 treatment are not able to activate 5-LO gene transcription. It was demonstrated, that in these cell lines the 5-LO core promoter is heavily methylated and that only demethylation by the DNA methyltransferase inhibitor 5-aza-2 deoxycytidine (Adc) upregulated the 5-LO mRNA levels. It was also shown that the histone deacetylase inhibitor TsA could induce 5-LO mRNA levels, but only in 1,25(OH)2D3/TGF-beta inducible MM6 cells. Interestingly the 1,25(OH)2D3/TGF-beta effect on 5-LO expression is reduced, when combined with TsA. Reporter gene assays revealed that 5-LO promoter activity is strongly induced after 24 h treatment with 330 nM TsA (construct N10 up to 35 fold in HeLa cells). The effect is dependent on the presence of the proximal Sp1 binding site GC4 (-53 bp to –48 bp in relation to the major TIS) in both HeLa and MM6 cells. In vitro binding of the transcription factor Sp1 to this site has been demonstrated in gel shift assays and DNase I footprints. Mutation of the binding site resulted in a loss of basal promoter activity in both 5-LO negative HeLa cells and in 5-LO positive MM6 cells, as well as in the loss of TsA inducibility. The mutational study of different Sp1 binding sites in a larger promoter context revealed the interaction or respectively the additive effect of the multiple Sp1 binding sites of the 5-LO promoter on basal as well as on TsA upregulated promoter activity. However, GC4 seems to be of special relevance for both the basal promoter activity, possibly recruiting the basal transcription machinery, as well as for the TsA induced upregulation of 5-LO promoter activity. TsA does not alter the protein expression levels of Sp1 and Sp3 as investigated in Western blot analysis, neither in HeLa nor in MM6 cells. DNA affinity purification assays revealed that TsA had no effect on the DNA affinity of Sp1 or Sp3. In vitro binding of both Sp1 and Sp3 to the 5-fold GC box, GC4 and GC5 was demonstrated by DAPA analysis, but histone deacetylase inhibition did not change the associated protein amounts. Finally, in vivo binding of Sp1 and Sp3 was investigated in chromatin immunoprecipitation assay (ChIP) in MM6 cells. TsA clearly induced the association of both proteins to the promoter area surrounding the TIS. Upon TsA treatment also RNA polymerase II binding to the area surrounding the TIS (-318 to +52 bp) was increased and even initiated in the more distal promoter parts –1049 to –292 bp, which are negatively regulated in reporter gene assays. Interestingly histone H4 is already highly acetylated without TsA treatment and the acetylation status of H4 remains unchanged after histone deacetylase inhibition, indicating an open chromatin structure of the 5-LO gene in MM6 cells. In a cotransfection study with Sp1 and Sp3, the transactivating potential of factors was investigated and in accordance with the ChIP data, Sp1 and Sp3 increased the promoter activity, but only after TsA treatment. In gel shift assays, the influence of DNA methylation on Sp1 binding was investigated. The results indicate different roles for the three proximal promoter sites. Whereas Sp1 binding to the 5-fold GC box and GC4 is impaired by DNA methylation, binding to GC5 is even increased. A cotransfection study with methylated 5-LO promoter constructs and the murine methyl-CpG binding proteins suggest MBD1 involvement in the regulation of the 5-LO promoter. Since in gel shifts Sp1 binding is inhibited by DNA methylation, at least to the 5-fold GC box and the activating element GC4, and similarly the mutation/deletion of the same sites strongly reduces or inhibits promoter activity, it is likely to assume, that the loss of promoter activity after in vitro methylation is in the first place due to impaired Sp1/Sp3 binding. Together the data underline the importance and complexity of Sp1/Sp3 binding to the GC rich sites in the regulation of 5-LO promoter activity in response to the histone deacetylase inhibitor TsA as well as in respect to DNA methylation.
Mitochondrien, Organellen der oxidativen Phosphorylierung, sind in vielfältiger Weise an Alterungsprozessen in unterschiedlichen Modellorganismen beteiligt. Viele Mechanismen und Faktoren, die das Altern beeinflussen, scheinen konserviert zu sein. In dem in dieser Arbeit untersuchten Ascomyzeten Podospora anserina treten z. B. altersabhängige Reorganisationen der mtDNA auf, die zu einem Verlust lebensnotwendiger Gene führen können. In Menschen wurden ebenfalls Umstrukturierungen des mitochondrialen Genoms in unterschiedlichen Geweben mit fortschreitendem Alter beschrieben. Umgekehrt treten manche Faktoren, die die Lebensspanne beeinflussen, nur in einigen Modellsystemen auf. Hierzu gehört z. B. die Induktion der alternativen Oxidase in vielen langlebigen P. anserina-Mutanten. Diese Modifikation in der Atmungskette kann in S. cerevisiae und Säugern nicht beobachtet werden, da diesen Organismen eine alternative terminale Oxidase der oxidativen Phosphorylierung fehlt. Der Fragestellung, wie die Atmungskette im Falle der exklusiven PaAOX-abhängigen Respiration in der unsterblichen Mutante ex1 hinsichtlich der Zusammensetzung und kinetischer Eigenschaften des Elektronentransports charakterisiert ist, wurde in der vorliegenden Arbeit nachgegangen. Über die funktionalen Eigenschaften der Mitochondrien hinaus ist auch die Morphologie dieser Organellen altersabhängiger Änderungen unterworfen. Hinsichtlich der Gestalt der Mitochondrien in verschiedenen Altersstadien ist nur sehr wenig bekannt. Bisher steht nur fest, dass der P. anserina-Wildstamm „S“ im mittelalten Stadium filamentöse Mitochondrien aufweist. Ob und in welchem Ausmaß es zu Veränderungen der mitochondrialen Morphologie während des Alterns im Wildstamm „s“ und der Mutante grisea kommt, wurde im Rahmen der vorliegenden Arbeit analysiert. In der vorliegenden Arbeit wurde darüber hinaus PaDnm1 als putativer mitochondrialer Teilungsfaktor charakterisiert. Insbesondere die Modulation der PaDnm1-Expression durch Überexpression bzw. Deletion soll zeigen, welchen Einfluss PaDnm1 auf die mitochondriale Morphologie und andere phänotypische Parameter wie z. B. die Lebensspanne hat. Die in dieser Arbeit durchgeführten Untersuchungen führten zu folgenden Ergebnissen: 1. Im Wildstamm „s“ wurde im Gegensatz zu ex1 durch enzymkinetische Analysen eine starke Interaktion der Komplexe I und III nachgewiesen. Ein Großteil der Komplexe I und III ist im Wildstamm „s“ in Form von Superkomplexen organisiert. In der Mutante ex1 liegen die Komplexe I und III dagegen hauptsächlich frei vor. Die spezifische Aktivität der Cytochrom-c-Reduktase ist in ex1 niedriger als im Wildstamm „s“. 2. Seneszente Isolate des Wildstammes „s“ und der PaDnm1::ble-Mutante weisen im Gegensatz zur Mutante grisea eine starke Freisetzung von Wasserstoffperoxid auf. 3. Juvenile und mittelalte Wildstamm „s“-Isolate enthalten überwiegend kurze, filamentöse Mitochondrien, die entlang der Hyphenachse im Cytoplasma orientiert sind. Im seneszenten Stadium kommt es zu einer starken mitochondrialen Fragmentierung. Der Übergang von einer filamentösen zu einer sphärischen Morphologie dieser Organellen tritt auch in Mutante grisea auf. In ex1-Hyphen sind hauptsächlich filamentöse Mitochondrien enthalten. Initiale Analysen zur mitochondrialen Feinstruktur zeigen, dass in Wildstamm „s“ und Mutante grisea eine lamellenartige Cristaestruktur erkennbar ist. In der Mutante ex1 hingegen erscheinen die Cristae ungeordneter und weniger zahlreich. 4. Die Mitochondrienfragmentierung im seneszenten Wildstamm „s“ korreliert mit einer Induktion der Transkription von PaDnm1. In Mutante grisea ist die PaDnm1-Transkriptmenge während des Alterns konstant, obwohl sich die mitochondriale Morphologie wie im Wildstamm „s“ verändert. Überexpression von PaDnm1 führt zur Mitochondrienfragmentierung während die gezielte Deletion dieses Gens eine starke Elongation der Mitochondrien zur Folge hat. PaDnm1 ist somit das erste in einem filamentösen Pilz charakterisierte Gen der mitochondrialen Teilungsmaschinerie. 5. PaDnm1::ble-Isolate zeigen im seneszenten Stadium mitochondriale Fragmentierung wie Wildstamm „s“ und Mutante grisea. Das mitochondriale Genom von PaDnm1::ble ist stabilisiert, d. h. die Bildung der seneszenzfördernden plDNA wird unterdrückt. Die mittlere Lebensspanne der PaDnm1::ble-Mutante ist deutlich (> Faktor 10) gegenüber der des Wild-stammes „s“ erhöht. Bemerkenswerterweise zeigt PaDnm1::ble im Gegensatz zu anderen langlebigen P. anserina-Mutanten nach der Sporenkeimung keine physiologischen Defekte: Wuchsrate, männliche und weibliche Fertilität, Myzelmorphologie und Mitochondrien-segregation während der Ascosporengenese sind nicht eingeschränkt. Allerdings weist PaDnm1::ble eine erhöhte Empfindlichkeit gegenüber Ammoniumazetat auf. Dies äußert sich in einer Inhibierung der Sporenkeimung und einer Verringerung der Wuchsrate bei Anzucht der Mutante auf AmAc-haltigem Medium.
Replizierende Murine Leukämieviren (MLV) können wertvolle Werkzeuge für die humane Krebsgentherapie werden, da sie das Transgen innerhalb des gewünschten Gewebes verteilen, ihr Genom stabil integrieren und einen natürlichen Tumortropismus aufweisen. In vorliegender Arbeit wurde ein System zur visuellen Analyse der MLV‐Replikation sowie der Virusbindung an Zielzellen mittels Einfügung fluoreszierender Proteine etabliert und als Werkzeug für dasDesign und die Optimierung dieser Viren als Gentherapievektoren benutzt. Zuerst wurde die Kodierungskapazität dieser Retroviren durch Aufteilen der viralen Gene auf zwei semireplikative Vektoren vergößert. Die Kopplung der Genome mit fluoreszierenden Proteinen ermöglichte ebenfalls in diesem Zusammenhang die Beobachtung der Repliktion aber auch die einfache Aufdeckung von Rekombinationsereignissen. Die Ergebnisse zeigten den Bedarf weiterer Optimierungen, stellten allerdings einen Vorreiter auf diesem Forschungsgebiet dar und zeigten das Potential dieses Systems auf (Sliva et al., 2004a). Zusätzlich zum natürlichen Tumortropismus sollte die Sicherheit von replizierenden Retroviren für die Tumortherapie erhöht werdn. Gezielte Veränderungen des ecotropen Hüllproteins zu EGFR‐exprimierenden Zellen mittels gerichteter Evolution sowie der Versuch, den Wirtstropismus des Env mit der Insertion des Liganden SDF‐1α auf humane CXCR4‐exprimierende Zellen auszuweiten, sind jedoch gescheitert. Diese Daten müssen sich in die Reihe der erfolglos gebliebenen Versuche, den Wirtstropismus des ecotropen Env auf humane Zellen auszuweiten, einreihen (Sliva et al., 2004b). Abschließend wurde shRNA als therapeutisches Effektormolekül erfolgreich mittels replikationskompetenter MLV in Zielzellen überragen, was zur deutlichen Herabsetzung des Proteinlevels des Zielproteins der siRNA führte (Sliva et al., 2006). Diese modifizierten Viren sind ein gutes Werkzeug zur einfachen in vitro Untersuchung von Genfunktionen, und könnten auch eine Erleichterung für die Untersuchung von Genfunktionen innerhalb von proliferierendem Tumorgewebe darstelln. Des Weiteren präsentieren die Ergebnisse und Beobachtungen dieser Arbeit einen großen Schritt in Richtung Anwendung dieser Virn für die humane Gentherapie. Denn gekoppelt mit z.B. einer tumorspezifischen Expression der shRNA‐Expressionskassette und der intelligenten Wahl der siRNA‐(Ziel)Sequenz, die nach Applikation zum Tod von malignen Tumorzellen führt, wären sie die perfekte Waffe gegen solide Tumoren.
Das Zytolysin ClyA von Escherichia coli ist der Prototyp einer neuartigen Familie von porenbildenden, bakteriellen Zytolysinen, welche in verschiedenen Vertretern der Enterobacteriaceae vorkommen. Es handelt sich bei diesem Toxin um ein Protein von 34 kDa, das hämolytische und zytotoxische Aktivität aufweist und das in Zellmembranen stabile Poren einführt, indem es sich zu ringförmigen ClyA-Oligomeren zusammenlagert. Die vorliegende Dissertation sollte einen Beitrag zur funktionalen Charakterisierung des ClyA-Proteins von E. coli K12 liefern. Insbesondere sollte die Bedeutung der N-terminalen Region für den Sekretionsmechanismus, für die hämolytische und porenbildende Aktivität, für die Interaktion mit Zielmembranen und für die Fähigkeit zur Oligomerisierung des Proteins analysiert werden. Im Rahmen dieser Arbeit wurden hierzu ClyA-Derivate mit spezifischen Mutationen innerhalb des N-terminalen Bereiches hergestellt und auf ihre Funktions-tüchtigkeit überprüft. Diese Untersuchungen gingen von den bestehenden Erkenntnissen aus, dass die Sekretion von ClyA über eine periplasmatische Zwischenstufe verläuft und keine N-terminale Prozessierung des Toxins erfolgt. Es wurde festgestellt, dass bereits kurze, sukzessive Deletionen innerhalb der beginnenden N-terminalen Region, wie die Deletion der Aminosäuren an Position zwei bis fünf (ClyA∆2-5) und sechs bis zehn (ClyA∆6-10), einen deutlich hemmenden Effekt auf den Transfer von ClyA über die zytoplasmatische Membran zur Folge hatte, welcher durch die Deletion der Aminosäuren an Position zwei bis zehn (ClyA∆2-10) weiter verstärkt wurde. Größere N-terminale Mutationen, wie die Deletionen der Aminosäuren an Position zwei bis fünfzehn (ClyA∆2-15) und zwei bis zwanzig (ClyA∆2-20) sowie interne Deletionen, die Aminosäuren jenseits von Aminosäureposition zehn betrafen (ClyA∆6-15, ClyA∆11-15, ClyA∆11-20, ClyA∆16-20), führten zur fast vollständigen Inhibierung (ClyA∆6-15) oder totalen Blockierung (ClyA∆11-15, ClyA∆11-20, ClyA∆16-20, ClyA∆2-20, ClyA∆2-15) des Transports von ClyA in den periplas-matischen Raum. Während die hämolytische Aktivität der ClyA-Mutanten ClyA∆2-5, ClyA∆6-10 und ClyA∆2-10 zwar abnahm, jedoch im Vergleich zu der des wildtypischen ClyA-Proteins noch verhältnismäßig hoch war, beeinflussten die weiteren Deletionen (ClyA∆6-15, ClyA∆11-15, ClyA∆11-20, ClyA∆16-20, ClyA∆2-15, ClyA∆2-20) die hämolytische Eigenschaft des Toxins ganz erheblich. So verursachten diese Mutationen eine massive Abnahme (ClyA∆6-15) bzw. einen kompletten Verlust (ClyA∆11-15, ClyA∆11-20, ClyA∆16-20, ClyA∆2-20, ClyA∆2-15) der zytolytischen Aktivität des ClyA-Proteins gegenüber Erythrozyten. Untersuchungen an künstlichen Lipidmembranen ergaben, dass die Deletion der Aminosäuren an Position zwei bis fünf, sechs bis zehn und zwei bis zehn die porenbildende Aktivität des ClyA-Proteins nur unwesentlich beeinträchtigt. Dagegen störte die Deletion der Aminosäuren an Position zwei bis fünfzehn und zwei bis zwanzig die porenbildende Eigenschaft von ClyA so tiefgreifend, dass keine (ClyA∆2-20) oder nur Transmembranporen mit extrem geringem Innendurchmesser (ClyA∆2-15) erzeugt wurden. Daneben spiegelten instabile Membranporen, die durch die ClyA-Mutanten ClyA∆6-15, ClyA∆11-15, ClyA∆11-20 und ClyA∆16-20 im künstlichen Lipid-Bilayer gebildet wurden, die negativen Auswirkungen dieser Mutationen auf die porenbildende Aktivität des Toxins wider. Die gesammelten Daten unterstreichen somit nicht nur die essentielle Bedeutung der N-terminalen Region des Zytolysins ClyA von E. coli K12 für den Transport in den periplasmatischen Raum, sondern auch für die hämolytische und porenbildende Eigenschaft des Toxins. Allerdings wurde die hämolytische und porenbildende Aktivität des ClyA-Proteins erst durch Mutationen ab Aminosäureposition zehn signifikant beeinträchtigt. Demgegenüber verdeutlichten Untersuchungen zum Bindungsverhalten an Zielzellen sowie Crosslinking-Experimente, dass die N-terminale Aminosäuresequenz von Position zwei bis zwanzig von ClyA weder für die Bindung an Erythrozyten noch für die Oligomerisierung des Toxins einen wesentlichen Faktor darstellt.
Soluble guanylyl cyclase (sGC) is a cytosolic enzyme producing the intracellular messenger cyclic guanosine monophosphate (cGMP) on activation with nitric oxide (NO) which leads to the activation of GMP dependent protein kinases and to vasodilation. NO signaling may be affected by altered expression of sGC subunits, as has been shown in different pathological and physiological conditions and developmental stages. The molecular mechanisms underlying altered sGC expression in these and other conditions have not yet been revealed. Gene expression can also be regulated at the level of mRNA through alterations in translational efficiency and in mRNA stability. HuR (Human R) is a ubiquitously expressed member of the embryonic lethal abnormal vision (ELAV) family of RNA-binding proteins. Among other RNAs, there has been recent evidence that the expression of sGC is subject to post-transcriptional regulation by HuR. It has been shown that chronic hypertension induces changes in HuR expression and activity, which account for decreased sGC expression and activity in the aorta of hypertensive rats. This thesis should study was performed in an effort to provide some insight to the transcriptional and post-transcriptional regulation of sGC expression in a mammal, the rat. We investigated rat sGC alpha-1 transcriptional regulation in rat lung fibroblast (RLF-6) cells. The 3000bp 5' upstream region of the alpha-1 sGC gene was isolated and analyzed for promoter activity by using luciferase reporter constructs- Alpha3000 (with -2794 bp), Alpha1100 (-1092 bp), Alpha350 (-346 bp) and Alpha200 (-200 bp). The promoter activity was the highest in the 200bp construct (about 6-fold higher than Alpha3000) suggesting that this fragment contains all the crucial elements necessary to support basal transcription of the alpha-1 sGC gene. Analysis of the 200 bp of the 5’ UTR of the alpha-1 gene was performed using the MATINSPECTOR V2.2 software for putative transcription factors. The constructs containing the deleted sites for NFY and Sp1 showed a significant decrease in constitutive promoter activity by almost 80% and 60% respectively, implying that these transcription factors are crucial elements in the basal expression of the of sGC alpha-1 subunit. Treatment of RLF-6 cells with genistein 50 microM and mithramycinA 100 nM, known to inhibit the NFY and Sp1 binding to DNA respectively, reflected the same effects. Furthermore the cGMP content of the cells was significantly reduced by both inhibitors, almost completely by genistein, and by about 40 % by mithramycinA. Electrophoretic mobility-shift assay (EMSA) clearly showed the formation of multiple complexes with the biotinylated ODN (decoy oligodeoxynucleotide) probes for NFY and Sp1 when incubated with RLF-6 nuclear extract. A “supershift” observed in the presence of antibodies to the individual transcription factors confirmed that these factors were present in the shifted band, indeed. NFY and Sp1 are instrumental in several physiological and pathophysiological effects mediated by several growth factors in smooth muscle cells. Thus the regulation of the promoter, in response to serum, was also analysed. 10% foetal calf serum led to decreased alpha-1 sGC level as shown by western blots performed with rat aorta. Decreased sGC alpha-1 mRNA expression was observed in RLF-6 cells and cultured rat aortic smooth muscle cells incubated with FCS for 24 hours. This decrease was reflected in the promoter activity in RLF-6 cells using both Alpha3000 and Alpha200 constructs confirming that the regulation took place at promoter level. EMSA performed with nuclear extracts from FCS treated RLF-6 cells led to diminished binding to NFY, but to an enhanced binding to Sp1 site. We concluded that the factors Sp1 and NFY (the sites overlapping) compete for binding, and in the presence of FCS, it is Sp1 that binds stronger, and hence results in diminishing promoter activity. In order to delineate the post-transcriptional regulation of sGC alpha-1 subunit, studies were performed to demonstrate the regulation of expression of the mRNA stabilizing protein HuR. It has been observed that exposure of isolated rat aortic segments to the activator of adenylyl cyclase, forskolin, strongly reduced sGC alpha-1/beta-1 and HuR protein and mRNA expression in a time-dependent and actinomycin D-sensitive fashion. Transcription factor decoy approach proved that the cAMP-induced down-regulation of HuR is mediated by the activation of AP-1. It has been established that HuR stabilises the sGC alpha-1 and beta-1 mRNA. However the pathway underlying this regulation remains unknown. In order to identify the mechanism of this regulation, we looked for HuR interacting proteins employing the yeast two hybrid assay. The enzyme of the polyamine catabolic pathway spermidine/spermine N1-acetyltransferase (SSAT) was found to interact with the hinge region of HuR. This interaction was confirmed by performing immunoprecipitation and GST-pulldown experiments. A direct effect of these proteins on each other’s biological activity was not visible as tested through the SSAT activity assay and HuR gel shift. It might be possible that SSAT-mediated modulation of local polyamine concentrations enhances/reduces HuR activity and sGC expression to affect cell proliferation. In summary, this study represents an analysis of the rat sGC alpha-1 promoter regulation in rat fibroblast cells and identifies NFY and Sp1 as important factors in sGC alpha-1 expression. It also gives first evidence of sGC regulation at the transcriptional level in response to an external stimulus, and proposes the possible mechanism. It also identifies SSAT as a HuR interacting protein. These might have implications in the various pathophysiological conditions where sGC plays an important role.
Boswellia serrata gum resin extracts (frankincense) have been used for centuries in folk medicine in Asia and Africa. They have shown beneficial therapeutic effects, particularly in the treatment of chronic inflammatory diseases. Clinical studies on humans confirmed an anti-inflammatory and anti-cancer potential of Frankincense preparations. Boswellic acids (BAs) are the major ingredients, responsible for the pharmacological action of the extracts. Molecular and cellular studies with BAs revealed a number of targets including 5-lipoxygenase (LO), topoisomerases and the NF-κB pathway. Since there is little information on the modulation of cellular physiology by BAs, this work was designed to provide a detailed investigation of the cellular and molecular effects of BAs in several cell types related to inflammation. We report that 11-keto-BAs are potent activators of functional responses in human neutrophils, a type of leukocytes mediating acute inflammatory processes. Neutrophil activation by 11-keto-BAs is reflected by enhanced generation of oxygen radicals, release of arachidonic acid (AA) and the subsequent transformation of AA to pro-inflammatory eicosanoids. Investigation of the participating signalling pathways identified Ca2+, phosphoinositide-3 kinase, and members of the MAP kinase family (ERKs) as mediators. Second, we present a detailed study of the modulation of human platelet physiology and intracellular signalling events by BAs. Intriguingly, we discovered an inverse structure-activity relationship of BAs regarding platelet activation, with 11-methylene-BAs being superior over 11-keto-BAs. Thus, 11-methylene-BAs stimulated platelet Ca2+ mobilisation, MAP kinase and Akt activation, AA release, 12-LO and cyclooxygenase product formation, and thrombin generation. Novel Ca2+-independent activation pathways of platelet lipid metabolism were discovered. In contrast, 11-keto-BAs were inactive but found to inhibit platelet (p)12-LO directly. Interaction with p12-LO was confirmed in a pulldown assay using immobilised BAs as bait. Finally, BAs were shown to attenuate the activation of monocytes, a cell type responsible for the maintenance of chronic inflammatory states. Impairment of Ca2+ homeostasis is likely conferred by inhibition of Ca2+ influx channels. Taken together, our results shed light on the modulation of intracellular physiology of inflammatory cells by BAs, contributing to a better understanding of the anti-inflammatory effects exerted by frankincense preparations.
Die Na,K-Pumpe ist ein integrales Membranenzym und gehört zur Gattung der P-Typ-ATPasen. Das Enzym setzt bei der Hydrolyse von ATP die resultierende freie Energie in aktiven Transport zur Errichtung eines Na+/K+-Konzentrationsgradienten über der jeweiligen Plasmamembran um. Diese Funktion wird mit einer strukturellen Alternierung zwischen zwei Hauptkonformationen E1 und E2 des Enzyms in Verbindung gebracht. In der vorliegenden Arbeit erfolgte eine Charakterisierung von Sekundärstruktur- und Proteinmikroumgebungsänderungen bei Teilreaktionen der Na,K-ATPase mittels reaktionsinduzierter und zeitaufgelöster FTIR-Differenzspektroskopie. Die hier verwendete IR-Durchlichttechnik setzt voraus, daß das zu untersuchende Enzym in hochreiner, hochkonzentrierter (1 mM) und aktiver Form in einen Proteinfilm in Gegenwart eines geschützten, photolytisch spaltbaren ATP-Derivats (caged ATP) überführt werden kann. In dieser Arbeit wurde zum ersten Mal eine umfassende IR-spektroskopische Beschreibung von einzelnen Teilreaktionen innerhalb des E1/E2-Reaktionsmodells der Na,K-ATPase durchgeführt. Die Untersuchung des Enzyms in Form eines Proteinfilms mit einer Schichtdicke von etwa 5 µm ist aufgrund der hohen Hintergrundabsorption des Wassers und der geringen Extinktionskoeffizienten der Proteinschwingungsmoden erforderlich. Der überwiegende Teil der Messungen wurde mit (1-(2-nitrophenyl)ethyl)-caged ATP und Schweinenierenenzym bei 5° und 15°C durchgeführt. Nach Abspaltung der Schutzgruppe mittels eines UV-Blitzes und somit der Freisetzung von ATP wurden zeitabhängig (Millisekunden bis Sekunden) die Differenzspektren verschiedener Teilreaktionen im Bereich von 2000 bis 950 cm-1 ermittelt. Der große Vorteil dieser Technik besteht in der Möglichkeit der Registrierung von Zustandsänderungen einzelner Aminosäuren des Proteins, in Bezug auf die Sekundärstruktur, Phosphorylierung, Protonierung und Kationenkoordination. Besonders gut können Änderungen an den Seitenketten der Aminosäuren Aspartat und Glutamat detektiert werden. Die enzymatische ATP-Hydrolyseaktivität der Na,K-ATPase wurde in den Proteinfilmen IR-spektroskopisch anhand der V as (PO2-) bei 1246 cm-1 bestimmt. Die Messungen der spezifischen Aktivität von Schweinenierenenzym ergab bei 15°C einen Wert von 34 nmol Pi mg-1 min-1. Vergleichsmessungen, die mit einem Standardaktivitätstest in Annäherung an die Protein-filmbedingungen durchgeführt wurden, ergaben Ergebnisse von der gleichen Größenordnung. In Abhängigkeit von der Zusammensetzung des kationischen Mediums konnten nach der photochemischen Freisetzung von ATP IR-Differenzspektren von drei verschiedenen Teilreaktionen untersucht werden: (1) ATP-Bindung, (2) Bildung des Phosphoenzyms E1P, (3) Bildung des Phosphoenzyms E2P. Des weiteren wurden Differenzspektren der AMPPNP-Bindung, der ADP-Bindung und der Ammoniumbindung, die mit der K+-Bindung vergleichbar ist, ermittelt. Alle Teilreaktionen führten zu unterschiedlichen Differenzspektren, die charakteristisch für die jeweiligen Zustandsänderungen sind. Durch geeignete Differenzbildung konnten ebenfalls die Differenzspektren der Phosphorylierung (EATP -> E1P) und der Phosphoenzym-Konversion (E1P -> E2P) berechnet werden. Sekundärstrukturänderungen können bei der IR-Spektroskopie innerhalb des Amid I-Bereichs zwischen 1700 und 1610 cm-1 detektiert werden. Die Ergebnisse der IR-Differenzspektroskopie zeigen, daß die Sekundärstruktur der Na,K-ATPase bei allen untersuchten Teilreak-tionen weitgehend konserviert bleibt. Unter den ermittelten Differenzspektren der Teilreaktionen resultiert die größte Netto-Sekundärstrukturänderung in einer Größenordnung von etwa 0,2 % (~3 Aminosäuren/Protomer) bei der E2P-Bildung. Als Folge der Bindung von ATP und ADP an das Enzym gibt es Evidenzen für die Beteiligung von Arginin. Die Bindung von AMPPNP an die Na,K-ATPase hingegen zeichnet sich klar durch andere molekulare Wechselwirkungen unter Beteiligung von Asp und/oder Glu aus. Die Phosphorylierung der Na,K-ATPase in Gegenwart von 1,2 M Na+ (E1P-Bildung) kann anhand von zwei Signalen der V (C=O) bei 1739 und 1709 cm-1, wobei eines der phosphorylierten Seitenkette Asp 369 zugeordnet wird, detektiert werden. Das zweite Signal wird der Protonierung eines Seitenkettenrestes Asp oder Glu zugerechnet, welches in Verbindung mit der Na+-Okklusion bei der E1P-Bildung stehen dürfte. Weitere Signale, die in Zusammenhang mit den molekularen Vorgängen bei der Phosphorylierung und Na+-Koordination stehen, können in der spektralen Region um 1550 cm-1 (V as(COO-)) und 1400 cm-1 (V s(COO-)) detektiert werden. Das Differenzspektrum der Phosphorylierung der Na,K-ATPase in Gegenwart von 130 mM Na+ (E2P-Bildung) enthält keine Beiträge der Kationenokklusion oder -deokklusion. Dennoch enthält das Differenzspektrum der E2P-Bildung die Information über die Transformation der Kationenbindungsstellen von E1 -> E2. Während E1 den Na+-affinen Zustand darstellt, repräsentiert E2 den K+-affinen Zustand der Na,K-ATPase. Das Signalprofil der Differenzspektren der E2P-Bildung unterscheidet sich stark von dem der E1P-Bildung. Neben der Phosphorylierung an Asp 369, die auch hier oberhalb von 1700 cm-1 anhand eines V (C=O)-Signals detektiert wird, können weitere positive und negative Signale sowohl oberhalb von 1700 cm-1 als auch im Bereich um 1550 cm-1 (V as(COO-)) und 1400 cm-1 (V s(COO-)) nachgewiesen werden. Bei der Transformation der Kationenbindungsstellen von E1 -> E2 können somit starke Änderungen an den Seitenketten von Asp und/oder Glu detektiert werden, die auf eine Neuorganisation der Kationenbindungsstellen der Na,K-ATPase schließen lassen. An dieser Neuorganisation sind sowohl Ände-rungen des Protonierungszustandes als auch Änderungen in der Koordinationssphäre der kationenkoordinierenden Gruppen Asp und/oder Glu beteiligt. Da von der Na,K-ATPase keine hochauflösenden Kristallstrukturen existieren, wurden die Kristallstrukturen der Ca-ATPase des sarkoplasmatischen Retikulums, ebenfalls eine P-Typ-ATPase, zur Erläuterung des Mechanismus der Kationenbindung herangezogen (Toyoshima et al., 2004b). Zur Ca-ATPase existieren bereits analoge IR-Differenzuntersuchungen. Dies bot die Möglich-keit des direkten Vergleichs gleicher Teilreaktionen innerhalb des gemeinsamen E1/E2-Reaktionsmodells. Dieser Vergleich zeigt, daß die Sekundärstrukturen beider Enzyme bei den jeweiligen Teilreaktionen weitgehend konserviert bleiben. Bei der Ca-ATPase können die größten Netto-Sekundärstrukturänderungen von etwa 0,3 % des Enzyms (~3 Aminosäuren/Enzym) als Folge der ATP-Bindung beobachtet werden (Barth et al., 1996). Bei dieser Teilreaktion werden bei der Na,K-ATPase die kleinsten Sekundärstrukturänderungen detektiert. Beim Vergleich der Signalprofile beider Enzyme weist der sekundärstrukturrelevante Amid I-Bereich bei der Phosphoenzym-Konversion auf konträre Strukturrelaxationen hin. Die Differenzspektren der Ca-ATPase im Vergleich zur Na,K-ATPase deuten auf eine sich unterscheidende Kationenkoordination hin. Durch eine Kombination der Resultate von IR-Differenz- und Fluoreszenzspektroskopie der FITC-Na,K-ATPase zur Charakterisierung von Enzymzuständen, konnte ein Modell zum Mechanismus der Inhibierung der Na,K-ATPase durch das Herzglucosid Ouabain postuliert werden. Durch Fluoreszenzmessungen an der FITC-Na,K-ATPase konnte gezeigt werden, daß Ouabain in Gegenwart von 20 mM Na+ an das Enzym bindet, was bei 130 mM Na+ nicht mehr der Fall ist. Aufgrund von IR-Differenzsignalen der E2P-Bildung, aufgenommen bei 20 mM Na+, ist es möglich, oberhalb von 1700 cm-1 (ν(C=O)), bei 1554 cm-1 (V as(COO-)) und bei 1408 cm-1 (V s(COO-)) zwischen der an Asp 369 phosphorylierten und unphosphorylierten Na,K-ATPase zu unterscheiden. Nach Ouabain-Zugabe hingegen konnten diese Signale nicht mehr detektiert werden. Bezüglich der Inaktivierung des Enzyms im Standardaktivitätstest, für dessen Ablauf Na+-Konzentrationen von um die 130 mM eingesetzt werden, kann gefolgert werden, daß Ouabain nicht an das freie, sondern an das phosphorylierte Enzym bindet und somit die Inaktivierung der Na,K-ATPase nach sich zieht.
NO ist ein gasförmiges Molekül, das durch drei verschiedene NO-Synthasen hergestellt werden kann. Die Signalkaskaden von NO sind multipel und sehr stark von der jeweiligen Konzentration abhängig. In niedrigen Dosen ist NO an der Regulation physiologischer Prozesse beteiligt, wohingegen hohe NO-Spiegel, wie sie von der induzierbaren NO Synthase (iNOS) im Verlauf von entzündlichen Erkrankungen produziert werden, zytotoxische Effekte wie Apoptose und Nekrose bedingen können. Der Wachstumsfaktor PDGF kann durch Inhibition der iNOS Expression, dieser hohen NO Produktion entgegen wirken. Ob NO im Gegenzug auch eine Wirkung auf das PDGF-System aufweist, sollte mit dieser Arbeit geklärt werden. Da die Aktivität von PDGF letztendlich von der Rezeptormenge abhängt, wurde die expressionsmodulatorische Wirkung von NO auf der PDGF-Rezeptorebene untersucht.
Im ersten Teil der Arbeit wurden MZ mit dem NO-Donator DETA-NO stimuliert. Mittels PCR-Analyse konnte gezeigt werden, dass NO die PDGFR-α-mRNA Expression zeit- und dosisabhängig induziert. Die Expression von PDGFR-β wird hingegen nicht wesentlich beeinflusst. Western-Blot-Analysen (WB) bestätigten die Regulierbarkeit des PDGFR-α auch auf Translationsebene. Als nächstes sollte geprüft werden, ob die durch exogene Applikation eines NO-Donatoren hervorgerufene Induktion des PDGFR-α auch durch eine endogene NO-Produktion imitiert werden kann. Hierzu wurden MZ mit dem Zytokin IL-1β inkubiert. IL-1β steigert die iNOS und auch die PDGFR-α-Expression durch Induktion von Transkriptionsfaktoren. Die IL-1β bedingte PDGFR-α-Expression könnte dabei über zwei Mechanismen reguliert werden: Einerseits über die gesteigerte Synthese von NO durch iNOS und andererseits durch direkte Interaktionen der IL-1β-induzierten Transkriptionsfaktoren mit dem PDGFR-α-Promotor. Um die NO bzw. iNOS-vermittelte von der Promotor-vermittelten Wirkung zu unterscheiden, wurden MZ zusätzlich mit dem NOS-Inhibitor L-NMMA inkubiert. L-NMMA war im Stande die durch IL-1β hervorgerufene Erhöhung der PDGFR-α Proteinmenge signifikant auf 60% zu reduzieren, was die Beteiligung der iNOS bzw. von NO an der IL-1β vermittelten Regulation des PDGFR-α impliziert. NO entfaltet seine Wirkung über verschiedene Signalkaskaden. Der klassische Weg verläuft über die Aktivierung der löslichen Guanylatzyklase (sGC). Um die Beteiligung der sGC an der NO-vermittelten Induktion des PDGFR-α zu untersuchen, wurden DETA-NO stimulierte MZ zeitgleich mit ODQ, einem Inhibitor der sGC inkubiert. Die durch NO verursachte Erhöhung der PDGFR-α-Proteinmenge konnte durch die gleichzeitige Zugabe von ODQ komplett gehemmt werden. Die Behandlung von MC mit dem sGC-Aktivator YC-1 imitierte andererseits den NO-Effekt. Beide Versuche zusammengenommen beweisen die Notwendigkeit der sGC-Aktivierung zur NO-vermittelten Induktion des PDGFR-α. Da viele Gene schon auf Transkriptionsebene durch NO beeinflusst werden, wurde der an einen Vektor gebundene PDGFR-α-Promotor vor das Luziferase-Gen kloniert und MZ mit diesem Konstrukt transfiziert. Die transfizierten MZ wurden mit DETA-NO oder 8-BromocAMP stimuliert. cAMP erhöht die Aktivität des PDGFR-α-Promotors und diente somit als Positivkontrolle. Die Promotoraktivität wurde indirekt über das Luziferase-Renilla-System bestimmt. Da NO im Gegensatz zu 8-Bromo-cAMP die Promotoraktivität nicht erhöhte, ist davon auszugehen, dass die NO-abhängige Induktion des PDGFR-α posttranskriptionell erfolgt oder, dass das NO-responsive Element nicht in unserem Konstrukt enthalten war.
Im letzten Abschnitt meiner Arbeit wurde die Funktionsfähigkeit des neusynthetisierten PDGFR-α Proteins bestätigt. Hierzu wurde die Phosphorylisierung vom PDGFR-α und von einem weiteren in der PDGF-Signalkaskade angeordneten Enzym, der antiapoptotisch wirksamen Proteinkinase B (PKB) untersucht. Mit DETA-NO vorbehandelte MZ wurden mit PDGF-BB stimuliert und eine Nachweisanalyse mit einem Phospho-spezifischen Antikörper der gegen pTyr720-PDGFR-α (pPDGFR-α) gerichtet ist, durchgeführt. Der Vergleich mit nichtvorbehandelten MZ belegt eindeutig, dass die NO vermittelte Erhöhung der basalen PDGFR-α-Proteinmenge auch zu einer Zunahme an detektierbarem pPDGFR-α führt, die dann wiederum eine Verstärkung der Signaltransduktion zur Folge hat. So konnten in DETANO vorbehandelten MZ, die mit dem α-Rezeptor spezifischen Liganden PDGF-AA stimuliert wurden, eine vergleichsweise erhöhte PKB-Phosphorylierung festgestellt werden. In einer Kooperation mit Dr. L. Schäfer (Universität Münster) konnte ferner gezeigt werden, dass die NO-Abhängigkeit der PDGFR-α Proteinexpression auch im Krankheitsverlauf eines experimentellen Glomerulonephritismodells, zu beobachten ist. Durch WB-Analysen und immunhistologischen Färbungen konnte dargelegt werden, dass die Vorinjektion des iNO-Sspezifischen Inhibitors L-NIL die Produktion von phosphoryliertem und unphosphoryliertem PDGFR-α Protein in Anti-Thy.1.1-behandelten Ratten signifikant hemmt. Zusammenfassend weisen die Ergebnisse darauf hin, dass NO über eine Aktivierung der sGC, die Produktion von funktionsfähigem PDGFR-α- Protein in vitro und in vivo steigert. Die pathophysiologische Bedeutung der NO-vermittelten Induktion des PDGFR-α im Krankheitsprozess der GN, wird gegenwärtig in weiteren in vivo Experimenten untersucht.
Identification and characterization of TNFalpha responsive genes in human breast cancer cells
(2006)
One of the hallmarks of cancer is the escape of the transformed cells from apoptosis. Therefore, the identification of survival genes, allowing cancer cells to circumvent programmed cell death, could provide new diagnostic markers as well as targets for therapeutic intervention. A well known transcription factor regulating the balance between pro- and anti- apoptotic factors is NF-kappaB, which is strongly induced by tumor necrosis factor alpha (TNFalpha). When cells are stimulated by TNFalpha their response is biphasic with an initial NF-kappaB induction of survival genes which is overridden by the subsequent activation of initiator caspases triggering apoptosis. By combining gene trap mutagenesis with site specific recombination a strategy was developed, which enriches for genes induced by TNFalpha in the human breast cancer cell line MCF-7. The strategy relies on a one way gene expression switch based on Cre/loxP mediated recombination, which uncouples the expression of a marker gene from the trapped cellular promoter thereby enabling the recovery of genes that are only transiently induced by TNFalpha. The marker gene used in these experiments was a dominant negative variant of the TNFalpha-receptor associated protein FADD (dnFADD), which blocks the apoptotic branch of the TNFalpha induced signaling pathway. Initial experiments indicated that MCF-7 cells expressing high levels of dnFADD were insensitive to TNFalpha induced apoptosis and therefore suitable for the installment of a one way gene expression switch susceptible to Cre/loxP mediated recombination. A MCF-7 reporter clone harboring the recombinase dependent gene expression switch was infected with the gene trap retrovirus U3Cre, which inserts the Cre recombinase gene into a large collection of chromosomal sites. Insertion of Cre downstream of an active cellular promoter induces dnFADD expression from the gene expression switch enabling the cells to block TNFalpha triggered apoptosis. From a gene trap integration library containing approximately 2000000 unique proviral integrations, 69 unique TNFalpha inducible gene trap insertion sites were recovered in a two step selection procedure. Sequencing of the genomic regions adjacent to the insertion sites, which were obtained by inverse PCR (gene trap sequence tags, GTSTs), and data base analysis revealed that 42% of the GTSTs belonged to annotated genes, 13% to known cDNAs with open reading frames, 17% to Genscan predicted genes, 9% to ESTs, 9% to repetitive sequences and 10% to unannotated genomic sequence. Overall, 44% of the annotated genes recovered in this screen were directly or indirectly related to cancer, indicating that the gene trap strategy developed here is suitable for the identification of cancer relevant genes. Analysis of the expression patterns of the trapped and annotated genes in wild type cells revealed that 19 out of 24 genes were either up- or down- regulated by a factor of at least 1.45 by TNFalpha. A large fraction of the gene trap insertions were located upstream, in introns or in opposite orientation to annotated transcripts, indicating that the strategy efficiently recovers non-coding RNAs (ncRNAs). While the biological significance of these transcripts still needs to be elucidated, they fall into two main categories. The first category includes gene trap insertions upstream of genes, which could either represent regulatory RNAs interacting with promoter elements or transcripts driven by bidirectional promoters. The second includes inverse orientation gene trap insertions in introns of annotated genes suggesting the presence of natural antisense transcripts (NATs). Interestingly, more than 50% of all antisense integrations are located downstream of transcription start sites predicted by different algorithms supporting the existence of RNAs transcribed from the corresponding genomic regions. Intronic integrations on the coding strand could be derived from cryptic splicing, alternative promoter usage or additional, so far uncharacterized transcripts. Preliminary functional analysis of two genes recovered in this screen encoding the transcription factor ZFP67 and the FLJ14451 protein revealed that FLJ14451 but not ZFP67 inhibited anchorage independent growth in soft agar, suggesting that FLJ14451 might have some tumor suppressor functions. In summary, besides identifying a putative tumor suppressor protein, the present experiments have shown that gene trapping is useful in identifying non-coding transcripts in living cells and may turn out to be the method of choice in characterizing these transcripts whose functions are still largely unknown.