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Cytoprotective functions of amyloid precursor protein family members in stress signaling and aging
(2013)
Poster presentation: Molecular Neurodegeneration: Basic biology and disease pathways Cannes, France. 10-12 September 2013.
Background: The amyloid precursor protein (APP) is processed via two different metabolic pathways: the amyloidogenic and the non-amyloidogenic pathway, the latter of which leading to generation of the secreted N-terminal APP fragment sAPPα [1]. Previous studies from our group suggest that sAPPα exerts potent neuroprotective effects and inhibits stress-triggered cell death via modulation of gene expression, as well as by antagonizing different types of neurotoxic stress [2]. It was also observed that the biochemical processing of APP is downregulated during aging which in turn reduced the secretion of sAPPα [3]. Based on these observations, we have studied the potential physiological function of sAPPα/APP and APLPs (APP like proteins) on the regulation of age-associated, stress induced signaling pathways, apoptosis and senescence.
Materials and methods: SH-SY5Y, PC12, IMR90 cells were used as cellular models. Depletion of APP, APLP1 (APP like protein 1) and APLP2 (APP like protein 2) in SH-SY5Y cells was achieved by stable lentiviral knockdown. To analyze the protective function of sAPPα, we have used conditioned supernatants of wild type APP overexpressing HEK cells and recombinant His-tagged sAPPα purified from yeast. The cells were treated with sAPPα prior to the addition of different stress stimuli (MG132, epoxomicin, UV, H2O2) after which cell death, gene expression and senescence were analyzed by MTT assays, caspase activity assays, Western blots and X-Gal staining respectively.
Results: Our data show that sAPPα can antagonize premature senescence induced by repetitive short term induction of proteasomal stress in IMR-90 cells and apoptosis triggered by prolonged proteasomal stress and other death stimuli in PC12, SH-SY5Y and IMR90 cells which was accompanied by a sAPPα-dependent inhibition of the JNK stress signaling pathway. In contrast, no significant changes in cell viability and apoptosis were observed when APP knockdown cells were pretreated with sAPPα.
Conclusions: Our observations suggest that sAPPα can antagonize both apoptosis and cellular senescence and requires expression of holo-APP to mediate its cytoprotective effects. They also support the notion that the physiological function of APP is linked to modulation of neuronal and brain aging.
Artificial environments for the co-translational stabilization of cell-free expressed proteins
(2013)
An approach for designing individual expression environments that reduce or prevent protein aggregation and precipitation is described. Inefficient folding of difficult proteins in unfavorable translation environments can cause significant losses of overexpressed proteins as precipitates or inclusion bodies. A number of chemical chaperones including alcohols, polyols, polyions or polymers are known to have positive effects on protein stability. However, conventional expression approaches can use such stabilizing agents only post-translationally during protein extraction and purification. Proteins that already precipitate inside of the producer cells cannot be addressed. The open nature of cell-free protein expression systems offers the option to include single chemicals or cocktails of stabilizing compounds already into the expression environment. We report an approach for systematic screening of stabilizers in order to improve the solubility and quality of overexpressed proteins co-translationally. A comprehensive list of representative protein stabilizers from the major groups of naturally occurring chemical chaperones has been analyzed and their concentration ranges tolerated by cell-free expression systems have been determined. As a proof of concept, we have applied the method to improve the yield of proteins showing instability and partial precipitation during cell-free synthesis. Stabilizers that co-translationally improve the solubility and functional folding of human glucosamine 6-phosphate N-acetyltransferase have been identified and cumulative effects of stabilizers have been studied.
Liveblog München, 3. Februar
(2013)
Live von der Münchner Sicherheitskonferenz bloggen hier Christopher Daase, Tobias Bunde, Thomas Mohr und Ingo Henneberg und von der Friedenskonferenz Hans Georg Klee und das SiPoBlog–Team. Weitere Informationen gibt es hier. Die Kommentarfunktion ist natürlich zusätzlich geöffnet für alle.
Die Sicherheitskonferenz beginnt wieder um 9h mit einer Session zu aktuellen Krisen (Mali, Syrien). Bei der Friedenskonferenz ist um 11.30h das Friedensgebet angesetzt.
Liveblog München, 2. Februar
(2013)
Liveblog München, 1. Februar
(2013)
Live von der Münchner Sicherheitskonferenz bloggen hier Christopher Daase, Tobias Bunde, Thomas Mohr und Ingo Henneberg und von der Friedenskonferenz Hans Georg Klee und euer SiPo-Team. Weitere Informationen gibt es hier. Die Kommentarfunktion ist natürlich weiterhin offen.Die Sicherheitskonferenz wird um 15h eröffnet, erste Eindrücke unten.
Das Internet ist ja per definitionem ein eher unordentlicher Ort. Das finden alle genau dann gut, wenn sich 14jährige Mädchen in Pakistan dadurch ausdrücken und emanzipieren können (auch wenn sich hinter einer solchen internet persona gerne mal ein alter weißer Mann verbirgt). Eher schlecht findet man es dagagen, wenn sich auch Fundamentalisten jeglicher couleur diese Freiheit im Netz zunutze machen. Da wollen die Innen- und Familienminister dieser Welt gleich regulieren, überwachen und strafen, doch… siehe oben. Zwischen diesen beiden Extrempolen pendeln sich die meisten Debatten über das Für und Wider der Internetnutzung ein. Auch in der Geisteswissenschaft – und dies hieß im konkreten Fall überwiegend: der Geschichtswissenschaft, wie wir auf einer Tagung in München feststellen konnten...
Humanitäre Interventionen sind seit den neunziger Jahren wiederkehrend im Fokus öffentlicher wie wissenschaftlicher Debatten. Erklärungen, warum sich Staaten entschließen, unabhängig von geopolitischen Interessen humanitäre Interventionen zu fordern oder sich an ihnen zu beteiligen, bleiben nach wie vor umstritten. Geteilte Moralvorstellungen und die Bereitstellung eines Handlungsrahmens für die Umsetzungspraxis sind zwei zentrale Analysedimensionen einer internationalen, humanitäre Interventionen befördernden Sicherheitskultur. Eine Normentwicklung kann in diesem Sinne nur in der Kombination mit tatsächlicher Akteurspraxis und medial-öffentlicher Aufmerksamkeit verstanden und beurteilt werden.
Im Rahmen eines umfangreichen Projekts zu Übersetzungsmöglichkeiten der deutschen Modalverben ins Portugiesische – und nachdem wir schon den Fall sollen behandelt haben (siehe Hörster/Athayde/Carecho 2011) – stellen wir in dieser Studie einige wesentliche Ergebnisse unserer Untersuchung bezüglich des Modalverbs müssen dar. Ziel unserer Arbeit war nicht die semantische und pragmatische Beschreibung der einzelnen Modalverben, ein Thema, das immer wieder im Mittelpunkt der wissenschaftlichen Diskussion steht. Vielmehr war es unsere Absicht, einen Beitrag zur zweisprachigen Lexikografie, zur Fremdsprachendidaktik und vor allem zur Übersetzungsdidaktik zu leisten.
Objectives Tumour recurrence of glioblastoma multiforme (GBM) after initial treatment with surgical resection, radiotherapy and chemotherapy is an inevitable phenomenon. This retrospective cohort study compared the efficacy of interstitial high dose rate brachytherapy (HDR-BRT), re-resection and sole dose dense temozolomide chemotherapy (ddTMZ) in the treatment of recurrent glioblastoma after initial surgery and radiochemotherapy.
Design Retropective cohort study.
Setting Primary level of care with two participating centres. The geographical location was central Germany.
Participants From January 2005 to December 2010, a total of 111 patients developed recurrent GBM after initial surgery and radiotherapy with concomitant temozolomide. The inclusion criteria were as follows: (1) histology-proven diagnosis of primary GBM (WHO grade 4), (2) primary treatment with resection and radiochemotherapy, and (3) tumour recurrence/progression.
Interventions This study compared retrospectively the efficacy of interstitial HDR-BRT, re-resection and ddTMZ alone in the treatment of recurrent glioblastoma.
Primary and secondary outcome measures Median survival, progression free survival and complication rate.
Results Median survival after salvage therapy of the recurrence was 37, 30 and 26 weeks, respectively. The HDR-BRT group did significantly better than both the reoperation (p<0.05) and the ddTMZ groups (p<0.05). Moderate to severe complications in the HDR-BRT, reoperation and sole chemotherapy groups occurred in 5/50 (10%), 4/36 (11%) and 9/25 (36%) cases, respectively.
Conclusions CT-guided interstitial HDR-BRT attained higher survival benefits in the management of recurrent glioblastoma after initial surgery and radiotherapy with concurrent temozolomide in comparison with the other treatment modalities. The low risk of complications of the HDR-BRT and the fact that it can be delivered percutaneously in local anaesthesia render it a promissing treatment option for selected patients which should be further evaluated.
Persistent neuropathic pain is a frequent consequence of peripheral nerve injuries, particularly in the elderly. Using the IntelliCage we studied if sciatic nerve injury obstructed learning and memory in young and aged mice, each in wild type and progranulin deficient mice, which develop premature signs of brain aging. Both young and aged mice developed long-term nerve injury-evoked hyperalgesia and allodynia. In both genotypes, aged mice with neuropathic pain showed high error rates in place avoidance acquisition tasks. However, once learnt, these aged mice with neuropathic pain showed a significantly stronger maintenance of the aversive memory. Nerve injury did not affect place preference behavior in neither genotype, neither in young nor aged mice. However, nerve injury in progranulin deficient mice impaired the learning of spatial sequences of awarded places, particularly in the aged mice. This task required a discrimination of clockwise and anti-clockwise sequences. The chaining failure occurred only in progranulin deficient mice after nerve injury, but not in sham operated or wildtype mice, suggesting that progranulin was particularly important for compensatory adaptations after nerve injury. In contrast, all aged mice with neuropathic pain, irrespective of the genotype, had a long maintenance of aversive memory suggesting a negative alliance and possibly mutual aggravation of chronic neuropathic pain and aversive memory at old age.
The inner structural Gag proteins and the envelope (Env) glycoproteins of human immunodeficiency virus (HIV-1) traffic independently to the plasma membrane, where they assemble the nascent virion. HIV-1 carries a relatively low number of glycoproteins in its membrane, and the mechanism of Env recruitment and virus incorporation is incompletely understood. We employed dual-color super-resolution microscopy visualizing Gag assembly sites and HIV-1 Env proteins in virus-producing and in Env expressing cells. Distinctive HIV-1 Gag assembly sites were readily detected and were associated with Env clusters that always extended beyond the actual Gag assembly site and often showed enrichment at the periphery and surrounding the assembly site. Formation of these Env clusters depended on the presence of other HIV-1 proteins and on the long cytoplasmic tail (CT) of Env. CT deletion, a matrix mutation affecting Env incorporation or Env expression in the absence of other HIV-1 proteins led to much smaller Env clusters, which were not enriched at viral assembly sites. These results show that Env is recruited to HIV-1 assembly sites in a CT-dependent manner, while Env(ΔCT) appears to be randomly incorporated. The observed Env accumulation surrounding Gag assemblies, with a lower density on the actual bud, could facilitate viral spread . Keeping Env molecules on the nascent virus low may be important for escape from the humoral immune response, while cell-cell contacts mediated by surrounding Env molecules could promote HIV-1 transmission through the virological synapse.
Within the last 30 years the role of nitrogen in Central European forests has changed fundamentally from limiting resource to environmental problem. As the retrospective tracking of nutrient availability by soil chemical and biogeochemical measurements faces serious problems, bioindication based on understorey species composition is indispensable for monitoring broad-scale eutrophication. Based on a broad survey of more than 100,000 forest vegetation plots accessible in electronic data-bases from Germany and adjacent countries, we calculated unweighted average Ellenberg nutrient values (mN) as a proxy of plant-available macronutrients. Based on the quantiles of the frequency distribution of mN in a regionally stratified sample, we define five trophic classes, which can be used to compare dimensionless mN values. We studied spatial patterns of average nutrient values within 17 regions and compared the periods from 1899 to 1975 and 1976 to 2006. After 1975 eutrophic (mN > 5.67) and hypertrophic (mN > 6.28) conditions were common everywhere except in the Alps and Saxony-Anhalt, but very oligotrophic conditions (mN < 3.44) were still widespread in regions with nutrient-poor bedrock. Before 1975 mN of plots had been lower than after 1975 in all but the southeastern regions. Between the pre- and post-1975 data the proportion of hypertrophic plots increased from 5.7 to 11.8%, and that of very oligo-trophic plots decreased from 14.6 to 8.3%. To remove bias resulting from uneven distribution, the dataset was stratified by five tree layer dominance types, period and region and resampled. In pre-1975 plots medians of mN increased in the order Pinus sylvestris, Quercus spp., Picea abies, Fagus sylvatica and Alnus spp, whereas the increase of mN was highest in forest types with historically low nutrient values. Therefore, the widespread change in mN must be attributed to the pronounced vegetation changes in Quercus and Pinus stands, indicating the importance of land-use change, i.e. recovery of nutrient cycles after hundreds of years of exploitation through coppicing, grazing and litter use. The analysis confirms eutrophication as a megatrend of modern vegetation change and demonstrates the high research potential of linking vegetation plot databases across large regions.
Diabetes is characterized by a dysregulation of glucose homeostasis and platelets from patients with diabetes are known to be hyper-reactive and contribute to the accelerated development of vascular diseases. Since many of the deleterious effects of glucose have been attributed to its metabolite methylgyloxal (MG) rather than to hyperglycemia itself, the aim of the present study was to characterize the effects of MG on platelet function. Washed human platelets were pre-incubated for 15 min with MG and platelet aggregation, adhesion on matrix-coated slides and signaling (Western blot) were assessed ex vivo. In vivo, the effect of MG on thrombus formation was determined using the FeCl3-induced carotid artery injury model. MG potentiated thrombin-induced platelet aggregation and dense granule release, but inhibited platelet spreading on fibronectin and collagen. In vivo, MG accelerated thrombus formation but decreased thrombus stability. At the molecular level, MG increased intracellular Ca2+ and activated classical PKCs at the same time as inhibiting PI3K/Akt and the β3-integrin outside-in signaling. In conclusion, these findings indicate that the enhanced MG concentration measured in diabetic patients can directly contribute to the platelet dysfunction associated with diabetes characterized by hyperaggregability and reduced thrombus stability.
Novel treatment options are needed for the successful therapy of patients with high-risk neuroblastoma. Here, we investigated the cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitor SNS-032 in a panel of 109 neuroblastoma cell lines consisting of 19 parental cell lines and 90 sublines with acquired resistance to 14 different anticancer drugs. Seventy-three percent of the investigated neuroblastoma cell lines and all four investigated primary tumor samples displayed concentrations that reduce cell viability by 50% in the range of the therapeutic plasma levels reported for SNS-032 (<754 nM). Sixty-two percent of the cell lines and two of the primary samples displayed concentrations that reduce cell viability by 90% in this concentration range. SNS-032 also impaired the growth of the multidrug-resistant cisplatin-adapted UKF-NB-3 subline UKF-NB-3rCDDP1000 in mice. ABCB1 expression (but not ABCG2 expression) conferred resistance to SNS-032. The antineuroblastoma effects of SNS-032 did not depend on functional p53. The antineuroblastoma mechanism of SNS-032 included CDK7 and CDK9 inhibition-mediated suppression of RNA synthesis and subsequent depletion of antiapoptotic proteins with a fast turnover rate including X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP), myeloid cell leukemia sequence 1 (Mcl-1), baculoviral IAP repeat containing 2 (BIRC2; cIAP-1), and survivin. In conclusion, CDK7 and CDK9 represent promising drug targets and SNS-032 represents a potential treatment option for neuroblastoma including therapy-refractory cases.
Two new colourful species of direct-developing frogs of the genus Pristimantis are described from the summit of two isolated tepuis (sandstone table mountains) in the Eastern Pantepui District of the Guiana Shield highlands. Pristimantis jamescameroni sp. nov. is described from the summit of Aprada-tepui from 2557-2571 m elevation, and P. imthurni sp. nov. is described from the summit of Ptaritepui at 2471 m elevation. Both species share the absence of a differentiated tympanic membrane and external tympanic annulus (but presence of tiny pharyngeal ostia), the presence of nuptial pads in males, and the presence of lateral fringes on fingers and toes, a combination of characters that immediately distinguishes them from all other known Pantepui congeners. The two new species are morphologically similar to each other and are phylogenetically closely related, but they can be distinguished based on colour pattern and morphological characters such as head proportions, dorsal skin texture, and condition of the supratympanic fold. The IUCN conservation status of the new species is considered as Endangered (EN) owing to their apparent very restricted ranges. The number of described Pristimantis species occurring exclusively on tepui (and faunistically related granitic mountains) summits and upper slopes now reaches eleven.
Insurance guarantee schemes aim to protect policyholders from the costs of insurer insolvencies. However, guarantee schemes can also reduce insurers’ incentives to conduct appropriate risk management. We investigate stock insurers’ risk-shifting behavior for insurance guarantee schemes under the two different financing alternatives: a flat-rate premium assessment versus a risk-based premium assessment. We identify which guarantee scheme maximizes policyholders’ welfare, measured by their expected utility. We find that the risk-based insurance guarantee scheme can only mitigate the insurer’s risk-shifting behavior if a substantial premium loading is present. Furthermore, the risk-based guarantee scheme is superior for improving policyholders’ welfare compared to the flat-rate scheme when the mitigating effect occurs.
Es wird allgemein vermutet, dass Klassenfahrten bei den Schülern nachhaltige Veränderungen bewirken können und nur wenige empirische Befunde belegen die Wirksamkeit von Klassenfahrten. Diese defizitäre Forschungslage aufgreifend, beschäftigt sich die vorliegende Arbeit mit der sozial-integrativen Wirkung einer sportbezogenen Klassenfahrt (Skifahrt) auf empirischer Grundlage.
Mit Hilfe der Desintegrationstheorie von Anhut & Heitmeyer (2000) lässt sich das Konstrukt „Integration“ in allgemeinerer Form über das antinomische Begriffspaar „Anerkennung vs. Ablehnung“ operationalisieren, wobei zwischen positionaler, moralischer und emotionaler Anerkennung bzw. Ablehnung unterschieden werden kann. Neben individuellen Merkmalen erfolgt die Vergabe und Verweigerung von Anerkennung über kollektive Merkmale, die auf Zugehörigkeit zu einer Gruppe beruht. Im pädagogischen Kontext der Schulklasse ist daher von besonderem Interesse, wie sich die Anerkennungsverhältnisse zwischen Gruppen verändern, denen besondere Potenziale für heterogenitätsbedingte Ablehnung zugeschrieben wird (vgl. Gerecke, 2010). Hypothetisch sind dies Mädchen „vs.“ Jungen, Jugendliche mit „vs.“ Jugendliche ohne Migrationshintergrund und bezüglich Klassenfahrten die Gruppe der Schüler, die nicht teilnehmen konnten „vs.“ der Gruppe derer, die teilgenommen haben. Auf dieser Grundlage beschäftigt sich die vorliegende Arbeit mit den Effekten sportbezogenen Klassenfahrten auf die soziale Integration operationalisiert in Anerkennungsverhältnissen.
Mittels eines soziometrischen Wahlverfahrens wurden die Anerkennungs- und Ablehnungsverhältnisse von vier Schulklassen (N=95) zu drei Messzeitpunkten (Eingangs-, Ausgangs- und Behaltenstest nach sechs Wochen) computergestützt erhoben.
Die Betrachtung der Gesamtgruppe zeigt eine Steigerung der positiven Wahlen (eta²=0,210) bei einer gleichzeitigen Reduktion der negativen Wahlen (eta²=0,167). Diese Entwicklung ist über Post-hoc-Einzelvergleiche auf eine signifikante Veränderung innerhalb des Treatmentzeitraumes (ET AT) zurückzuführen. Das Intervall AT-BT nach Abschluss der Klassenfahrt ist nicht signifikant, so dass auf eine zeitliche Stabilität der Ergebnisse geschlossen werden kann. Allerdings sind große Unterschiede zwischen den einzelnen Klassen festzustellen, die nicht teilweise nicht mit dem Gesamtergebnis übereinstimmen. In der differenzierten Betrachtung der heterogenitätsbedingten Unterschiede ist in erster Linie ein Geschlechtereffekt zu erkennen. Insbesondere die positiven und negativen Wahlen zwischen Schülern verschiedenen Geschlechts verändern sich signifikant. Aber auch hier zeigen sie die bereits dargestellten klassenspezifischen Differenzen.
Während der Teilnahmestatus keinen Einfluss auf die Vergabe von negativen und positiven Wahlen besitzt, beeinflusst der Migrationsstatus hingegen die positiven Wahlen signifikant.
Mit Blick auf die theoretischen Grundlagen dieser Arbeit kann der Anstieg der positiven Wahlen als Zuwachs von Anerkennung und der Rückgang negativer Wahlen als eine Reduktion von Ablehnung interpretiert werden, wobei sich kein einheitliches Bild auf Klassenebene ergibt.
Anhut, R. & Heitmeyer, W. (2000). Desintegration, Konflikt und Ethnisierung. Eine Problemanalyse und theoretische Rahmenkonzeption. In W. Heitmeyer (Hrsg.), Bedrohte Stadtgesellschaft. Soziale Desintegrationsprozesse und ethnisch-kulturelle Konfliktkonstellationen (S. 17–73). Weinheim: Juventa-Verlag.
Gerecke, P. (2010). Heterogenitätsbedingte Unterschiede zwischen Ingroup- und Outgroup-Anerkennung bzw. -Ablehnung im Sportunterricht. Eine empirische Studie zum integrativen Einfluss des Kooperativen Lernens. Dissertation. Frankfurt am Main: Johann-Wolfgang Goethe Universität.
Durch RNAinterferenz (RNAi) läßt sich die Expression eines beliebigen Gens spezifisch unterdrücken. Dafür müssen in das Zytoplasma kurze, doppelsträngige RNA Moleküle (siRNA bzw. shRNA) eingebracht werden, die teilweise komplementäre Sequenzen zu dem Zielgen aufweisen. Um siRNAs mit einer hohen Effizienz und Kopienzahl in die Zielzelle einzubringen, wurden Transfersysteme unterschiedlicher Art entwickelt. Nicht-virale Transfersysteme können nur einen transienten Effekt auslösen - ein Umstand, der für Langzeitstudien eine mehrfache Transfektion bedingt. Zur Lösung dieses Problems wurden retrovirale Vektorsysteme entwickelt, die durch Integration der shRNA-Expressionskassette in das zelluläre Genom eine stabile Unterdrückung eines Zielgens erreichen können. Insbesondere für präklinische Studien in vivo ist jedoch ein System mit erhöhter Transferrate wünschenswert, um in möglichst vielen Zielzellen einen RNAi-Effekt zu bewirken. Sliva et al. konnten zeigen, dass das Murine Leukämie Virus (MLV) theoretisch diese Anforderung erfüllt. Dafür wurde eine shRNA-Expressionskassette in das Virusgenom eingefügt und in vitro ein RNAi-Effekt nachgewiesen. In der vorliegenden Arbeit wurde dieses System nun durch die Verwendung von microRNA-adaptierten shRNAs (shRNAmir) verbessert. In mehreren Publikationen wurde bestätigt, dass shRNAs, die endogenen microRNAs nachempfunden sind, eine höhere Effizienz und niedrigere Toxizität aufweisen. Zunächst wurde die für die genetische Stabilität optimale Orientierung der shRNAmir-Expressionskassette bestimmt. Das Konstrukt in reverser Orientierung wies eine Deletion in der shRNAmir Promotersequenz auf, die wahrscheinlich durch Interferenz mit dem 5’LTR Promoter entstanden ist. Mit dem genetisch stabilen Viruskonstrukt wurden Experimente zur Reduktion der Expression von Markergenen durchgeführt, um die Effizienz der RNAi-Aktivität leicht zu quantifizieren. Dafür wurden humane Fibrosarkom (HT1080) Zellen infiziert, die eGFP oder Luziferase stabil exprimieren.
Mit eGFP- und Luziferase-spezifischen shRNAmir-Expressionskassetten konnte nach Infektion eine Herunterregulation von eGFP auf etwa 20 % und für Luziferase auf unter 10% beobachtet werden. Das Kontrollvirus, das eine unspezifische shRNAmir kodiert, hatte keinen Einfluss auf die Expression beider Markerproteine. Die Kinetik mit der die Markerproteine herrunterreguliert wurden, war abhängig von der Virusdosis. Die Virusdosis hatte aber keinen Einfluß auf die Stärke des RNAi-Effekts, der nach Infektion aller Zellen festgestellt werden konnte. Dieses Ergebnis entspricht der Erwartung an ein replikatives Transfersystems, das je nach applizierter Virusdosis unterschiedlich schnell RNAi in der Zellkultur ausbreitet und induziert. Die Anwendbarkeit dieses RNAi-Transfersystems auch für endogene Gene wurde mit MMP14-spezifischen shRNAmirs gezeigt. Nach Infektion von HT1080 Zellen mit den entsprechenden Viren in HT1080 Zellen konnte eine verringerte Menge an MMP14 mRNA und Protein nachgewiesen werden. Dies konnte funktionell durch eine verringerte Menge an intermediärem MMP2 und durch eine reduzierte Invasivität bestätigt werden. Zudem war die Fähigkeit dieser Zellen subkutane Tumore zu bilden stark eingeschränkt.
Um die Anwendbarkeit dieses Systems für in vivo Applikationen zu zeigen, wurde in Mäuse, die Luziferase-exprimierenden Tumoren trugen, MLV-shLuc oder das Kontrollvirus systemisch appliziert. 21 Tage nach Virusgabe konnte in den Tumoren von MLV-shLuc infizierten Mäusen eine Abnahme der Luziferaseaktivität auf 15 % nachgewiesen werden. Auch in Mäusen, die systemisch applizierte Tumorzellen erhielten, konnte eine Tendenz von RNAi-vermittelter Luziferase-Reduktion beobachtet werden.
Damit wurde in dieser Arbeit ein neuartiges RNAi-Transfersystem geschaffen, das in der Lage ist, auch in vivo einen starken und lang andauernden RNAi-Effekt auszulösen. Die Einzigartigkeit besteht in der Kombination von shRNAmir und Replikations-kompetenten Retroviren. Dadurch konnte eine erweiterte Transferrate von shRNAmir in Tumorzellen erreicht werden, so dass nun Genfunktionsstudien mit sehr hoher Aussagekraft möglich sind.
Weimarer Beiträge 59/2013
(2013)
Die Weimarer Beiträge sind eine Zeitschrift für Literaturwissenschaft, aktuelle ästhetische Theorie und Kulturwissenschaft. Zu Ihren Schwerpunkten gehören moderne Literatur im Rahmen anderer Künste und Medien, die Wechselbeziehungen von Literatur, philosophischer und ästhetischer Reflexion sowie die kritische Analyse der Gegenwartskultur.