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Health-care personnel (HCP) are exposed to infectious diseases throughout the course of their work. The concerns of pregnant HCP are considerable because certain otherwise mild infections may affect fetal development. We studied 424 pregnant HCP at the University Hospital Frankfurt / Germany between March 2007 and July 2011. Serological tests were carried out for varicella zoster virus (VZV), measles, mumps, rubella (MMR), cytomegalovirus (CMV) and parvovirus B19. Our overall seroprevalence data with regard to VZV, MMR, CMV and parvovirus B 19 corresponded to the general population. It was striking that, only 57.1% of the study population was immune against the four vaccine-preventable diseases (MMR, VZV). Our study suggests that a comprehensive approach to improving the vaccination status of said HCP before pregnancy is paramount.
Die allergische Rhinitis hat sich in den letzten Jahrzehnten durch Anstieg der Prävalenz und Zunahme von Symptomhäufigkeit und -schwere zu einem global bedeutsamen und kostenintensiven Gesundheitsproblem entwickelt. Mit Hilfe der derzeit geltenden Behandlungsoptionen kann eine deutliche Verbesserung der Lebensqualität erzielt werden, eine langfristige Heilung ist bislang eher selten und eine Prophylaxe von Neuerkrankungen kaum möglich. Aufgrund des hohen Forschungsaufkommens zur AR existieren weltweit eine Vielzahl an Publikationen, welche z. B. Untersuchungen zur Entschlüsselung der Pathomechanismen dieser multifaktoriellen Erkrankung, Studien für effektive pharmakologische Therapien und Forschungen auf dem Gebiet der Immunmodulation beinhalten.
In dieser Arbeit wurde eine quantitative Analyse dieser wissenschaftlichen Arbeiten unter Zuhilfenahme von szientometrische Verfahren durchgeführt, wobei auf die Daten der Datenbank des "ISI Web of Science" zurückgegriffen wurde. Nach Festlegung eines komplexen Suchbegriffes, der alle relevanten Arbeiten zum Thema der AR einschließt, wurden die 11.951 im ISI WoS veröffentlichten Publikationen (Zeitraum von 1900-2007) im Rahmen von unterschiedlichsten Fragestellungen untersucht und die Ergebnisse kritisch begutachtet. Für die Darstellung der Fakten mit der höchsten Relevanz wurden verschiedene Diagrammarten zur grafischen Präsentation gewählt. Globale Sachverhalte wurden überwiegend anhand von Diffusionskartenanamorphoten veranschaulicht.
Seit Beginn der 90er-Jahre ist ein sprunghafter Anstieg von wissenschaftlichen Veröffentlichungen zum Thema der AR zu konstatieren. Die höchste Zahl an Veröffentlichungen konnte für das letzte Jahr der Analyse mit 923 Artikeln festgestellt werden. Anhand der seit 1991 stark zunehmenden Anzahl an Veröffentlichungen und den bereits seit Mitte der 80er-Jahre anhaltend hohen Zitationszahlen kann spätestens mit Beginn der 90er-Jahre ein großes wissenschaftliches Interesse an der AR insbesondere in den Industrienationen abgelesen werden, welches scheinbar bis zum letzten Analysejahr fortbestand. Fast 50% aller veröffentlichten Artikel stammen aus nur 4 Industrienationen. Dazu zählen die USA, das UK, Deutschland und Japan, wovon allein die USA fast ein Viertel der gesamten Publikationen auf sich vereint.
Mehr als 90% der analysierten wissenschaftlichen Artikel aus über 110 Herkunftsländern wurden in englischer Sprache veröffentlicht. Etwas über 4% aller Artikel wurden in deutscher und ca. 2% in französischer Sprache publiziert.
Bei den Zeitschriftenanalysen hatten vor allem auf Allergie und Immunologie spezialisierte Zeitschriften die größte Anzahl an Veröffentlichungen zu verzeichnen, wobei die Journale "Journal of Allergy and Clinical Immunology" und "Allergy" die meisten Artikel (jeweils über 1.000 Publikationen) veröffentlicht haben. Die Fachzeitschrift "Journal of Allergy and Clinical Immunology" wurde mit Abstand am häufigsten zitiert (35.572 Zitate). Die höchsten Zitationsraten wurden für die weltweit bekannten und renommierten Fachjournale "The New England Journal of Medicine" und "The Lancet" ermittelt.
Nach Ländern gewichtet, wurden vor allem Publikationen aus den USA, dem UK und Deutschland äußerst häufig zitiert. Auch die ermittelten H-Indices dieser 3 Länder waren die höchsten, was bei den Untersuchungen jedoch in direktem Zusammenhang mit der großen Zahl an von diesen Ländern hervorgebrachten wissenschaftlichen Artikel gesehen werden muss. Bei Betrachtung der Zitationsraten liegen beispielsweise andere Länder, wie z. B. Neuseeland, Indien, Norwegen und Finnland, an der Spitze, obwohl dort deutlich weniger Artikel veröffentlicht wurden.
Im Rahmen der Analysen dieser Arbeit konnte aufgezeigt werden, dass die Zahl der Kooperationen zwischen Autoren und Ländern in den letzten Jahren stark zugenommen hat. Als Gründe können z. B. die verbesserten internationalen Beziehungen, die Globalisierung, sowie die sich ständig weiterentwickelnden technischen Kommunikationsmöglichkeiten hervorgehoben werden. Sehr intensive wissenschaftliche Beziehungen konnten zwischen den USA und dem UK, sowie den USA und Kanada, aber auch innerhalb Europas, z. B. zwischen dem UK und Schweden, festgestellt werden.
Die Analysen dieser Arbeit geben für die Datenbank "ISI WoS" in dem untersuchten Zeitraum ein v. a. in den Industrienationen bestehendes, aber tendenziell weltweit zunehmendes Forschungsinteresse zum Thema der AR wieder, wobei v. a. in den letzten Jahren ein Anstieg von nationalen und internationalen Kooperationsbeziehungen zu beobachten war. In den nächsten Jahrzehnten wird sich zeigen inwieweit sich das Publikationsverhalten entwickeln wird und ob beständige Forschung auf diesem Gebiet zu einer deutlichen Reduktion der hohen Prävalenz beitragen kann. Für die Betroffenen bleibt zu hoffen, dass in Zukunft weitere wichtige Erkenntnisse über diese Erkrankung gewonnen und daraus optimierte Behandlungsmöglichkeiten resultieren werden.
Altered metabolism in tumor cells is increasingly recognized as a core component of the neoplastic phenotype. Because p53 has emerged as a master metabolic regulator, we hypothesized that the presence of wild-type p53 in glioblastoma cells could confer a selective advantage to these cells under the adverse conditions of the glioma microenvironment. Here, we report on the effects of the p53-dependent effector Tp53-induced glycolysis and apoptosis regulator (TIGAR) on hypoxia-induced cell death. We demonstrate that TIGAR is overexpressed in glioblastomas and that ectopic expression of TIGAR reduces cell death induced by glucose and oxygen restriction. Metabolic analyses revealed that TIGAR inhibits glycolysis and promotes respiration. Further, generation of reactive oxygen species (ROS) levels was reduced whereas levels of reduced glutathione were elevated in TIGAR-expressing cells. Finally, inhibiting the transketolase isoenzyme transketolase-like 1 (TKTL1) by siRNA reversed theses effects of TIGAR. These findings suggest that glioma cells benefit from TIGAR expression by (i) improving energy yield from glucose via increased respiration and (ii) enhancing defense mechanisms against ROS. Targeting metabolic regulators such as TIGAR may therefore be a valuable strategy to enhance glioma cell sensitivity toward spontaneously occurring or therapy-induced starvation conditions or ROS-inducing therapeutic approaches.
The demand to develop convergent technology platforms, such as bio-functionalized medical devices, is rapidly increasing. However, the loss of biological function of the effector molecules during sterilization represents a significant and general problem. Therefore, we have developed and characterized a nano-coating (NC) formulation capable of maintaining the functionality of proteins on biological-device combination products. As a proof of concept, the NC preserved the structural and functional integrity of an otherwise highly fragile antibody immobilized on polyurethane during deleterious sterilizing irradiation (≥ 25 kGy). The NC procedure enables straight-forward terminal sterilization of bio-functionalized materials while preserving optimal conditioning of the bioactive surface.
Background. Spontaneous reports of herb induced liver injury (HILI) represent a major regulatory issue, and it is in the interest of pharmacovigilance to identify and quantify previously unrecognized adverse reactions and to confirm or refute false positive signals of safety concerns. In a total of 13 spontaneous cases, liver disease has initially been attributed to the use of Pelargonium sidoides (PS), a plant from the South African region. Water/ethanol extracts derived from its roots are available as registered herbal drugs for the treatment of upper respiratory tract infections including acute bronchitis. Objectives. The present study examines whether and to what extent treatment by PS was associated with the risk of liver injury in these spontaneous cases. Study design: Overall, 13 spontaneous cases with primarily suspected PS hepatotoxicity were included in the study. Their data were submitted to a thorough clinical evaluation that included the use of the original and updated scale of CIOMS (Council for International Organizations of Medical Sciences) to assess causality levels. These scales are liver specific, validated for liver toxicity, structured and quantitative.
Results. None of the 13 spontaneous cases of liver disease generated a positive signal of safety concern, since causality for PS could not be established on the basis of the applied CIOMS scales in any of the assessed patients. Confounding variables included comedication with synthetic drugs, major comorbidities, low data quality, lack of appropriate consideration of differential diagnoses, and multiple alternative diagnoses. Among these were liver injury due to comedication, acute pancreatitis and cholangitis, acute cholecystitis, hepatic involvement following lung contusion, hepatitis in the course of virus and bacterial infections, ANA positive autoimmune hepatitis, and other preexisting liver diseases. In the course of the case assessments and under pharmacovigilance aspects, data and interpretation deficits became evident. Possible improvements include appropriate data quality of cases in spontaneous reports, case assessment by skilled specialists, use of a validated liver specific causality assessment method, and inclusion only of confirmed cases into the final regulatory case database.
Conclusions. This study shows lack of hepatotoxicity by PS in all 13 spontaneous cases as opposed to initial judgment that suggested a toxic potential of PS. Major shortcomings emerged in the pharmacovigilance section that require urgent improvements.
Herbal hepatotoxicity is a rare and poorly described disease because reported cases are mostly scattered and lack an appropriate causality assessment. We now describe in detail the clinical picture of herbal hepatotoxicity by extracts of Greater Celandine (GC), syn. Chelidonium majus L. from the Papaveraceae family, which contain more than 20 ingredients including various biologically active isoquinoline alkaloids. For this purpose, we analyzed and reviewed published cases of 16 patients from various European countries. In all patients, herbal hepatotoxicity was of probable and highly probable causality for GC, using the original and updated scale of CIOMS (Council for International Organizations of Medical Sciences). GC associated hepatotoxicity usually has an acute clinical course exhibiting a hepatocellular pattern of injury and is correlated to an idiosyncratic reaction with its metabolic subtype. Jaundice combined with high values of serum aminotransferases was present in virtually all cases with favourable outcome despite severe clinical course. In conclusion, GC hepatotoxicity is a typical herbal hepatotoxicity with a sound causality track for GC, but there is uncertainty regarding the respective causative compound(s). The present detailed review of GC hepatotoxicity may serve as an example for clinical causality assessments of future cases of liver injury due to other herbs.
Identification of translationally deregulated proteins during inflammation-associated tumorigenesis
(2012)
The translation of mRNAs into proteins is an elaborate and highly regulated process. Translational regulation primarily takes place at the level of initiation. During initation the eukaryotic initiation factors (eIFs) form a complex that binds to the 5’end of the mRNA to scan for a start codon. Once recognized, the ribosome is recruited to the mRNA and protein synthesis starts. Initiation of translation can basically occur via two distinct mechanisms, i.e. cap-dependent and cap-independent that is mediated via internal ribosome entry sites (IRESs). The former is mediated by a 5’cap structure composed of a 7-methylguanylate which is added to every mRNA during transcription and recruits the initiation complex. IRES-dependent translation involves elements within the 5’untranslated region (UTR) of the mRNA that mostly bind IRES trans-acting factors (ITAFs) which associate either with the initiation complex or with the ribosome itself and consequently allow for internal initiation of translation.
During tumorigenesis the demand for proteins is increased due to rapid cell growth, which consequently requires enhanced translation. Many factors that regulate translation are overexpressed in tumors. Moreover, signaling pathways that trigger translation or further hyperactivated by the surrounding tumor microenvironment. This environment is largely generated by infiltration of immune cells such as macrophages that secrete cytokines and other mediators to promote tumorigenesis. As the effects of inflammatory conditions on the translation of specific targets are only poorly characterized, my study aimed at identifying translationally deregulated targets during inflammation-associated tumorigenesis.
For this purpose, I cocultured MCF7 breast tumor cells with conditioned medium of activated monocyte-derived U937 macrophages (CM). Polysome profiling and microarray analysis identified 42 targets to be regulated at the level of translation. The results were validated by quantitative PCR and one target - early growth response 2 (EGR2) - was chosen for in depth analysis of the mechanism leading to its enhanced translation.
In order to identify upstream signaling molecules causing enhanced EGR2 protein synthesis the cytokine profile of CM was analyzed and the impact of several cytokines on EGR2 translation was examined. Preincubation of CM with neutralizing antibodies revealed that lowering interleukin 6 (IL-6) had only little effect, whereas depletion of IL 1β significantly reduced EGR2 translation. This finding was corroborated by the fact that treatment with recombinant IL-1β enhanced EGR2 translation to virtually the same extend as CM. Further experiments revealed that this effect was mediated via the p38-MAPK signaling cascade.
Interestingly, I observed that the mTOR inhibitor rapamycin, which reduces cap-dependent translation, specifically stimulated EGR2 translation. This result argued for an IRES-dependent mechanism that might account for EGR2 translation. The use of bicistronic reporter assays verified this hypothesis. In line with the above mentioned results, CM, IL-1β and p38-MAPK induced EGR2-IRES activity.
Since IRESs commonly require ITAFs to mediate translation initiation, the binding of proteins to the 5’UTR was analyzed using mass spectrometry. Among others, several previously described ITAFs, such as polypyrimidine tract-binding protein (PTB) and heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1 (hnRNP-A1) were identified to directly bind to the EGR2-5’UTR. Furthermore, overexpression of hnRNP-A1 enhanced EGR2-IRES activity whereas a dominant negative form of hnRNP-A1 significantly decreased it, thus, showing its importance for EGR2 translation.
In summary, my data provide evidence that EGR2 expression can be controlled by IRES-dependent translational regulation, which is responsive to an inflammatory environment. The identified mechanism may not be exclusive for one target but might be representative for gene expression regulation mechanisms during tumorigenesis. This is of special interest for the treatment of cancer patients and development of more specific therapies to reduce tumor outcome.
Ein charakteristisches Merkmal von Autoimmunerkrankungen ist der selektive Angriff des Immunsystems auf einen einzigen Zelltyp, ein Organ oder Gewebe durch bestimmte T- und B-Lymphozyten. Die genaue Ursache von Autoimmunerkrankungen bleibt bislang ungeklärt, jedoch scheint eine bestimmte genetische Konstellation bei Zusammentreffen mit im weitesten Sinne umweltbedingten Faktoren die Reaktionen zu erklären. Zu solchen umweltbedingten Faktoren gehören auch Infektionen. Häufig werden Assoziationen zwischen Infektion und autoimmuner Erkrankung beobachtet. Auch kann bei einer akuten Infektion ein vorhandener Autoimmunprozess exazerbieren. Eine schnelle Verteidigung gegen Infektionen gewährleistet das angeborene Immunsystem, bevor das adaptive Immunsystem zum Tragen kommt. Die Moleküle, die bei diesen Abwehrprozessen frei werden, können zur T-Zell-Vermehrung führen, die einerseits eine effektive Selbstverteidigung möglich macht; ander erseits können sie aber auch die Vermehrung autoreaktiver T-Zellen zur Folge haben. An frühen Vorgängen nach dem Kontakt mit einem Pathogen ist eine Vielzahl von Zyto- und Chemokinen beteiligt. Typ-1-Interferone (IFN1) sind ebensolche Zytokine, die vor allem in der Abwehr gegen Viren eine Rolle spielen und in mehrschrittigen Prozessen auch zur Aktivierung von T- und B-Zellen führen. IFIH1 ist ein intrazellulärer Rezeptor, der dsRNA im Zytosol detektiert und in der Folge die Transkription von IFN1 aktiviert. Veränderungen im Gen dieses Rezeptors zeigen Assoziationen zu Typ-1-Diabetes (T1D) und bieten einen funktionellen Berührungspunkt zwischen früher Infektabwehr durch das angeborene Immunsystem und der letztlich gewebszerstörerischen T- und B-Zell-Reaktion. In dieser Arbeit wurde daher die Assoziation dreier endokriner Autoimmunopathien mit dem IFH1-Polymorphismus rs1990760 durchgeführt, der in der Literatur als deutlich assoziiert mit T1D beschrieben wird. Mit Hashimoto-Thyreoditis, Morbus Basedow und Morbus Addison wurden Krankheiten gewählt, die im genetischen Hintergrund viele Gemeinsamkeiten untereinander und mit T1D aufweisen. Durch die in der Literatur beschriebenen Assoziationen mit T1D rückt nun der IFIH1-rs1990760 Polymorphismus potentiell auch in das genetische Anfälligkeitsprofil dieser endokrinen Autoimmunopathien. Für die Assoziationsanalyse wurde in dieser Arbeit DNA von betroffenen Individuen und gesunden Kontrollen mittels RT-PCR auf den IFIH1-Polymorphismus rs1990760 (Allele „A“/„G“) typisiert und die Genotyp- und Allelhäufigkeiten verglichen. Außerdem wurden Familienanalysen durchgeführt und die Transmission der Allele auf Unterschiede im Vererbungsverhalten hin untersucht. Es konnten keine statistisch relevanten Assoziationen zwischen dem IFIH1-Polymorphismus rs1990760 und Hashimoto-Thyreoditis, Morbus Basedow und Morbus Addison gefunden werden. Weiterhin wurden Subgruppen gebildet, um eventuell in der Gesamtgruppe nicht erkennbare Trends aufzudecken. Für Hashimoto-Thyreoditis und Morbus Basedow wurde der HLA-Typ DQ2 als Risikotyp angenommen, für Morbus Addison der Typ HLA-DQ2/DQ8. Der Antikörperstatus der untersuchten Individuen wurde ebenfalls in die Untersuchung einbezogen. In der Familienanalyse mit an Hashimoto-Thyreoditis erkranktem Kind wurden Subgruppen gebildet, die den TPO-Ak und Tg-Ak-Status der Eltern berücksichtigen. Bei Morbus Basedow wurde der TSH-R-Antikörper bei der Fall-Kontroll-Analyse zur Subgruppenbildung herangezogen. Wenn sich auch keine statistisch eindeutigen Assoziationen nachweisen ließen, so waren bei Hashimoto-Thyreoditis und Morbus Basedow in einigen Subgruppen doch Tendenzen zu erkennen, die eine Beteiligung des Polymorphismus an der genetischen Anfälligkeit vermuten lassen könnten. Die beobachteten Trends deuten darauf hin, dass in bestimmten Patientengruppen der untersuchte Polymorphismus eine Rolle in der Anfälligkeit spielen könnte.
Ubiquitin-binding modules are constituents of cellular proteins that mediate the effects of ubiquitylation by making transient, non-covalent interactions with ubiquitin molecules. While some ubiquitin-binding modules bind single ubiquitin moieties, others are selective for specific ubiquitin chains of different linkage types and lengths. In recent years, functions of ubiquitin chains that are polymerized through their Lys or N-terminal Met (i.e. linear chains) residues have been linked to a variety of cellular processes. Selectivity of ubiquitin-binding modules for different ubiquitin chain types appears as a key to the distinct regulatory consequences during protein quality control pathways, receptor endocytosis, gene transcription, signaling via the NF-κB pathway, and autophagy.
Background: Radiofrequency ablation is a minimal invasive therapy in the treatment of bone metastases. In this study we present a new ablation system enabling an ablation in multiple directions and with an adaptable size and shape.
Material and methods: VX-2 tumor was used for the induction of experimental bone metastases in the femur of six New Zealand white rabbits. X-ray imaging as well as CT and MRI scans before and after treatment was carried out. After detecting bone tumor, radiofrequency ablation was performed. The ablation instrument contained a 10 g bipolar, articulated extendable electrode and a proprietary generator with an impedance controlled algorithm. All bones and the soft tissue were examined histologically.
Results: All animals developed local bone tumor. Mean duration until first osteolytic lesions on CT-scans was 48±14 days. The mean lesion area was 26 mm(2). No systemic tumor spread was seen. 6 radiofrequency procedures were carried out with a mean application time of 6 min±2:30 and an average temperature in the region of effect of 55 °C±4. MRI imaging demonstrated an ablation zone of 23±6 mm around the electrode. Histopathology showed an extensive heat necrosis with no remaining tumor cells in the ablation area.
Conclusion: Radiofrequency ablation is a quickly developing treatment option on the field of minimal invasive bone tumor therapy. The electrode enables an ablation adapted to size and shape of the metastases. Further clinical studies are necessary to test and enhance this radiofrequency system.
Introduction: We report on successful endovascular treatment of a hydrofluoric acid burn to the hand.
Report: A worker complained of severe pain in the fingers D II to D V after injury with 60% hydrofluoric acid. A digital subtraction angiography showed vasospasm of the common palmar digital artery. We selectively applied 20% calcium gluconate intra-arterially.
After treatment all arteries were perfused. Alprostadil, acetylsalicylic acid and clopidogrel were administered in conjunction. Pain symptoms improved and sensory and motor functions were restored.
Discussion: Immediate angiography and intra-arterial application of calcium gluconate are recommended to treat hydrofluoric acid burn to a limb.
Inhibitor of apoptosis (IAPs) proteins are characterized by the presence of evolutionarily conserved baculoviral inhibitor of apoptosis repeat (BIR) domains, predominantly known for their role in inhibiting caspases and, thereby, apoptosis. We have shown previously that multi-BIR domain-containing IAPs, cellular IAPs, and X-linked IAP can control tumor cell migration by directly regulating the protein stability of C-RAF kinase. Here, we extend our observations to a single BIR domain containing IAP family member melanoma-IAP (ML-IAP). We show that ML-IAP can directly bind to C-RAF and that ML-IAP depletion leads to an increase in C-RAF protein levels, MAPK activation, and cell migration in melanoma cells. Thus, our results unveil a thus far unknown role for ML-IAP in controlling C-RAF stability and cell migration.
Die Gegenübertragung hat sich mittlerweile zu einem der wichtigsten Instrumente der stationären psychosomatischen Therapie entwickelt. Ihr kommt in der psychodynamischen Psychotherapie für das Verständnis der unbewussten Konflikte und für den damit zusammenhängenden Behandlungserfolg eine zentrale Funktion zu. Dies gilt für die Einzeltherapie, aber auch für die integrative stationäre psychodynamische Therapie und deren „Herzstück“ (Janssen 2004) - das multiprofessionelle Team. Die Ziele der Arbeit bestehen - abgesehen von der Beschreibung der Faktorenstruktur und Reliabilität des Gegenübertragungsfragebogens - darin, herauszufinden, ob sich a) die Gegenübertragung in unterschiedlichen Therapieverfahren unterscheidet, b) in welcher Weise die Gegenübertragung mit dem Beziehungserleben und der Beziehungsgestaltung des Patienten zusammenhängt, c) ob die Gegenübertragung mit der Belastung des Patienten zusammenhängt und d) ob sich die Gegenübertragung abhängig von der Diagnose unterscheidet.
Methode: Dazu wurde mithilfe des Gegenübertragungsfragebogens (CTQ-D)
die Gegenübertragung von 137 Patienten durch mehrere Therapeuten (Ärzte, Psychologen und Pflegekräfte) aus zwei psychosomatischen Kliniken zu Therapiebeginn und zum Therapieende erhoben. Insgesamt flossen 1131 Fragebögen in die Auswertung mit ein. Die Faktorenanalyse des CTQ-D ergab eine Lösung mit sieben statistisch und klinisch kohärenten Faktoren: 1) aggressiv-resignative GÜ, 2) positiv-zugeneigte GÜ, 3) überwältigt-verängstigte GÜ, 4) protektiv-elterliche GÜ, 5) desinteressierte GÜ, 6) verstrickte GÜ und 7) sexualisierte GÜ. Die Patienten füllten die Symptomcheckliste (SCL-90R), den Helping Alliance Questionaire (HAQ), das Inventar zur Erfassung interpersonaler Probleme (IIP) und den Fragebogen zur Erhebung von Persönlichkeitsstörungen (ADP-IV) zu Beginn und zum Ende der Therapie aus. Ergebnisse: Es konnten einige spezifische und signifikante Zusammenhänge zwischen der Gegenübertragung der Therapeuten und den Selbstbeurteilungsinstrumenten der Patienten nachgewiesen werden: a) Konfliktorientierte Therapieverfahren (Gesprächstherapien) erzeugen bei den Therapeuten höhere aggressiv-resignative Gegenübertragung, erlebnisorientierte Therapieverfahren (Körpertherapie und Gestaltungstherapie) rufen höhere positiv-zugeneigte, protektiv-elterliche und verstrickte Gegenübertragung hervor. b) Die Beziehungszufriedenheit der Patienten ist
umso größer, je geringer die aggressiv-resignative Gegenübertragung von den Therapeuten wahrgenommen wird und die Therapiezufriedenheit ist umso größer, je geringer die aggressiv-resignative, überwältigt-verängstigte und protektiv-elterliche Gegenübertragung ausgeprägt ist. Ein hoher IIP-Wert bei den Patienten hängt mit dem Erleben von überwältigt-verängstigter Gegenübertragung zusammen. c) Patienten mit hohem GSI rufen bei den Therapeuten hohe aggressiv-resignative, überwältigt-verängstigte, desinteressierte und geringe positiv-zugeneigte Gegenübertragung hervor. Verstrickte, positiv-zugeneigte und sexualisierte Gegenübertragung hängen mit einem guten Therapieverlauf zusammen, aggressiv-resignative und desinteressierte Gegenübertragung deuten auf eine schlechte Entwicklung im Verlauf hin. d) Die höchsten Werte der aggressiv-resignativen, überwältigtverängstigten und protektiv-elterlichen GÜ und die geringste positiv-zugeneigte GÜ wird bei der Gruppe der Persönlichkeitsstörungen wahrgenommen. Den höchsten Wert der positiv-zugeneigten und der verstrickten GÜ erreicht die Gruppe der Essstörungen. Somatoforme Störungen rufen in den Therapeuten ein hohes Maß an Desinteresse hervor. Die Gruppe der affektiven Störungen erzeugt bei den Therapeuten in allen Dimensionen geringe Gegenübertragungsgefühle. Folgerung: Die Ergebnisse verdeutlichen, dass die Gegenübertragung ein aussagekräftiges Instrument zur Beurteilung der Beziehungsgestaltung, der Belastung und der Verlaufsbeurteilung der Patienten auf einer psychosomatischen Station darstellt. Sie betonen auch die Bedeutung der Auflösung negativer Gegenübertragungskonstellationen durch Supervisionen und Teambesprechungen im stationären Alltag. Dabei bedürfen schwierige Patienten, beispielsweise mit somatoformer Störung oder Persönlichkeitsstörung besonderer Aufmerksamkeit. Dem CTQ-D kann neben dem Einsatz als wissenschaftlichem Instrument im Rahmen der Ausbildung und im klinischen Alltag zur Vorhersage des Therapieverlaufs umfassende Bedeutung zukommen.
Introduction. Balapiravir (R1626, RG1626) is the prodrug of a nucleoside analogue inhibitor of the hepatitis C virus (HCV) RNA-dependent RNA polymerase (R1479, RG1479). This phase 2, double-blind international trial evaluated the optimal treatment regimen of balapiravir plus peginterferon alfa-2a (40KD)/ribavirin.
Material and methods. Treatment-naive genotype 1 patients (N = 516) were randomized to one of seven treatment groups in which they received balapiravir 500, 1,000, or 1,500 mg twice daily, peginterferon alfa2a (40KD) 180 or 90 Mg/week and ribavirin 1,000/1,200 mg/day or peginterferon alfa-2a (40KD)/ribavirin. The planned treatment duration with balapiravir was reduced from 24 to 12 weeks due to safety concerns.
Results. The percentage of patients with undetectable HCV RNA was consistently higher in all balapiravir groups from week 2 to 12. However, high rates of dose modifications and discontinuations of one/all study drugs compromised the efficacy assessment and resulted in similar sustained virological response rates in the balapiravir groups (range 32-50%) and the peginterferon alfa-2a (40KD)/ribavirin group (43%). Balapiravir was discontinued for safety reasons in 28-36% of patients (most often for lymphopenia) and the percentage of patients with serious adverse events (especially hematological, infection, ocular events) was dose related. Serious hematological adverse events (particularly neutropenia, lymphopenia) were more common in balapiravir recipients. Two deaths in the balapiravir/peginterferon alfa-2a/ribavirin combination groups were considered possibly related to study medication.
Conclusion. Further development of balapiravir for the treatment of chronic hepatitis C has been halted because of the unacceptable benefit to risk ratio revealed in this study (www.ClinicalTrials.gov NCT 00517439).
Tumor-associated macrophages (TAM) are a major supportive component within neoplasms and by their plasticity promote all phases of tumor development. Mechanisms of macrophage (M Phi) attraction and differentiation to a tumor-promoting phenotype, defined among others by distinct cytokine patterns such as pronounced immunosuppressive interleukin 10 (IL-10) production, are largely unknown. However, a high apoptosis index within tumors and strong M Phi infiltration correlate with poor prognosis. Thus, I aimed at identifying signaling pathways contributing to generation of TAM-like M Phi by using supernatant of apoptotic cancer cells (ACM) as stimulus.
To distinguish novel factors involved in generating TAM-like M Phi, I used an adenoviral RNAi-based approach. The primary read-out was production of IL-10. However, mediators modulating IL-10 were re-validated for their impact on regulation of the cytokines IL-6, IL-8 and IL-12. Following assay development, optimization and down-scaling to a 384-well format, primary human M Phi were transduced with 8495 constructs of the adenoviral shRNA SilenceSelect® library of Galapagos BV, followed by activation to a TAM-like phenotype using ACM. I identified 96 genes involved in IL-10 production in response to ACM and observed a pronounced cluster of 22 targets regulating IL-10 and IL-6. Principal validation of five targets of the IL-10/IL-6 cluster was performed using siRNA or pharmacological inhibitors. Among those, IL-4 receptor-alpha and cannabinoid receptor 2 were confirmed as regulators of IL-10 and IL-6 secretion.
One protein identified in the screen, the nerve growth factor (NGF) receptor TRKA was chosen for in-depth validation, based on its involvement in IL-10, IL-6 and IL-12 secretion from ACM-stimulated human M Phi. TRKA possesses a cardinal role in neuronal development, but compelling evidence emerges suggesting participation of TRKA in cancer development. First experiments using pharmacological inhibitors principally confirmed the involvement of TRKA in IL-10 secretion by ACM-stimulated M Phi and revealed PI3K/AKT and to a lesser extend MAPK p38 as important signaling molecules downstream of TRKA activation. Signaling through TRKA required the presence of its ligand NGF, as indicated by NGF neutralization experiments. NGF was not induced by or present in ACM, but was constitutively secreted by M Phi. Interestingly, M Phi responded to authentic NGF with neither AKT and p38 phosphorylation nor IL-10 production. TRKA is well known to be transactivated by other receptors and in neurons its cellular localization is decisive for its function. Inhibitors of common transactivation partners did not influence IL-10 production by human M Phi. Rather, ACM-treatment provoked pronounced translocation of TRKA to the plasma membrane within 10 minutes as observed by immunofluorescence staining. Consequently, I was intrigued to clarify mechanisms of TRKA trafficking in response to ACM.
The bioactive lipid sphingosine-1-phosphate (S1P) has been previously identified as important apoptotic cell-derived mediator involved in TAM-like M Phi polarization. Indeed, I observed S1P and src kinase involvement in ACM-mediated IL-10 induction. Furthermore, inhibition of S1P receptor (S1PR) signaling or src kinase activity prevented TRKA translocation, whereas a TRKA inhibitor or anti-NGF did not block TRKA trafficking to the plasma membrane in response to ACM. Thus, autocrine secreted NGF activated TRKA to promote IL-10 secretion, which required previous S1PR/src-dependent translocation of TRKA to the plasma membrane. Following the detailed analysis of IL-10 regulation, I was interested whether other TAM phenotype markers were influenced by ACM and whether their expression was regulated through TRKA-dependent signaling. Five of six markers were up-regulated on mRNA level by ACM, and secretion of IL-6, IL-8 and TNF-alpha was triggered. S1PR-signaling was essential for induction of all but one marker, whereas TRKA signaling was only required for cytokine secretion. Interestingly, none of the investigated TAM markers was regulated identically to IL-10, emphasizing a tight and exclusive regulation machinery of this potent immunosuppressive cytokine.
Finally, I aimed to validate the in vitro findings in human ACM-stimulated M Phi. Therefore, I isolated murine TAM as well as other major mononuclear phagocyte populations from primary oncogene-induced breast cancer tissue. Indeed, TRKA-dependent signaling was required for spontaneous cytokine production selectively by primary murine TAM. Besides IL-10, the TRKA pathway was decisive for secretion of IL-6, TNF-alpha and monocyte chemotactic protein-1, indicating its relevance in cancer-associated inflammation.
In summary, my findings highlight a fine-tuned regulatory system of S1P-dependent TRKA trafficking and autocrine NGF signaling in TAM biology. Both factors, S1P as well as NGF, might be interesting targets for future cancer therapy.
Recent data have clearly shown that a sustained virologic response can be achieved in different HCV infected patient populations with various interferon-free treatment regimens. Despite the successful implementation of telaprevir- and boceprevir-based triple therapies, all-oral regimens will certainly become a first choice for a number of HCV-infected patients in the very near future, as triple therapy approaches are burdened with significant side-effects and limited success in patients with advanced liver fibrosis and prior null-response to pegylated interferon-α (pegIFN-α)/ribavirin therapy. However, available data from phase I and II clinical trials evaluating interferon-free regimens have not yet revealed a clearly outstanding all-oral combination, and numerous challenges remain to be addressed by intensive ongoing and future research. In particular, thus far evaluated all-oral regimens did not cure a satisfactory percentage of patients with unfavorable baseline characteristics, namely patients infected with HCV genotype 1a, previous null-response to pegIFN-α/ribavirin, or liver cirrhosis. In this review, we summarize available data of interferon-free regimens for the treatment of chronic hepatitis C and assess implications for perspectives and challenges in the further development of all-oral therapies.
Das Nachsorgekonzept nach lumbalen Bandscheiben-Operationen beruht auf biomechanischen Untersuchungen von Nachemson, die bereits 1966 publiziert worden sind. Seine Studien zeigten, dass sich das Sitzen nach Bandscheiben- Operationen und bei Rückenschmerzpatienten ohne Operation ungünstig auf den Rehabilitationsprozess auswirkt. Aufgrund dieser Befunde wurde das Verbot des Sitzens in das Rehabilitationskonzept aufgenommen und ist noch immer weit verbreitet. Häufig entstehen dabei aus einer ängstlichen Vermeidungshaltung muskuläre Dysbalancen. Es habituiert sich ein erhöhter Tonus der Erector trunci-Muskulatur. So können myotendinotische Sekundärbeschwerden auftreten, die zu einer verzögerten beruflichen und sozialen Wiedereingliederung beitragen. Dabei ist vor allem die verzögerte berufliche Reintegration volkswirtschaftlich von großer Relevanz. Neue Untersuchungen, insbesondere von Wilke et al., Rohlmann et al. und Althoff et al., konnten die von Nachemson im Sitzen erhobenen Daten nicht bestätigen. Aufgrund dieser Ergebnisse lässt sich die Arbeitshypothese aufstellen, dass die bisher übliche Empfehlung, das Sitzen zu vermeiden, für Patienten nach lumbalen Bandscheiben-Operationen obsolet ist. Es kann vielmehr davon ausgegangen werden, dass eine Lockerung dieser Richtlinie die Rehabilitation und die berufliche Wiedereingliederung nach lumbalen Bandscheiben-Operationen erleichtern und beschleunigen kann. Weiterhin kann davon ausgegangen werden, dass der Heilungsprozess, durch eine Be- und Entlastung und damit durch eine verbesserte Diffusion beschleunigt werden kann, wenn in der postoperativen Phase ein liberales Regime bezüglich der Körperhaltung eingeführt und die Wahl der Position dem Patienten weitgehend selbst überlassen wird. Der Patient sollte selbst die Körperhaltung wählen, die er als bequem empfindet. Ängste werden reduziert und die myotendinotischen Sekundärbeschwerden dürften abnehmen. Zu diesem Zweck wurde eine klinische Untersuchung durchgeführt, die insgesamt 50 Patienten in zwei Gruppen randomisiert. Eine Gruppe, als liberal bezeichnet, erhielt eine Sitzerlaubnis, die andere, als konventionell definiert, weiterhin Sitzverbot. Anhand von drei klinischen Nachuntersuchung, zwei von den Patienten selbst auszufüllenden Fragebögen (Oswestry -Schmerskala und Allgemeinen Depressionsskala), einem Sitz- und Schmerztagebuch und zum Abschluss eine MRT- Untersuchung der LWS vor und nach Kontrastmittelgabe, sollten die beiden Gruppen miteinander verglichen und die o. g. Hypothesen verifiziert oder falsifiziert werden. Der Vergleich der beiden Gruppen anhand der klinischen Untersuchungen ergab statistisch keinen signifikantern Unterschied im Hinblick auf den postoperativen Verlauf, insbesondere der postoperativen Schmerzen und Beschwerden, bzw. Behinderungen wie z. B. Lähmungen oder Sensibilitätsstörungen. Ebenso verhält es sich bei der Auswertung der Oswestry- Schmerzskala und der ADS- L. Auch hier ergaben alle Befragungen keine signifikanten Unterschiede zwischen den beiden Gruppen, so dass nicht von einer erhöhten Einschränkung der Patienten der liberalen Gruppe im Alltag ausgegangen werden kann. Das Sitz- und Schmerztagebuch zeigt ebenfalls keine signifikanten Unterschiede innerhalb der ersten 28 postoperativen Tage. Deutlich war zu erkennen, dass eine tägliche Steigerung der Sitzdauer nicht mit einer Erhöhung der Schmerzintensität oder einem vergrößerten Beschwerdebild einherging. Auch die Ergebnisse der MRT- Untersuchung der LWS wiesen keine nennenswerten Unterschiede zwischen den beiden Gruppen auf, die möglicherweise gegen eine Sitzerlaubnis gesprochen hätten. Die Erkenntnisse, die aus diesen Resultaten gewonnen werden können, bestätigten die o.g. Vermutungen, dass die Erlaubnis des Sitzens während der postoperativen Phase nicht zu einem verlängerten oder erschwerten Verlauf der Genesung führt oder sich schädlich auf diesen auswirkt. Das Sitzverbot kann als veraltet angesehen werden und, wenn weitere Untersuchungen die Beobachtungen bestätigen, sogar aus dem Therapieregime genommen werden. Eine frühere berufliche Wiedereingliederung erscheint mit einem liberalen postoperativen Regime erreichbar.
We proposed previously that closure of voltage-dependent anion channels (VDAC) in the mitochondrial outer membrane after ethanol exposure leads to suppression of mitochondrial metabolite exchange. Because ureagenesis requires extensive mitochondrial metabolite exchange, we characterized the effect of ethanol and its metabolite, acetaldehyde (AcAld), on total and ureagenic respiration in cultured rat hepatocytes. Ureagenic substrates increased cellular respiration from 15.8 ± 0.9 nmol O(2)/min/10(6) cells (base line) to 29.4 ± 1.7 nmol O(2)/min/10(6) cells in about 30 min. Ethanol (0-200 mM) suppressed extra respiration after ureagenic substrates (ureagenic respiration) by up to 51% but not base line respiration. Urea formation also declined proportionately. Inhibition of alcohol dehydrogenase, cytochrome P450 2E1, and catalase with 4-methylpyrazole, trans-1,2-dichloroethylene, and 3-amino-1,2,3-triazole restored ethanol-suppressed ureagenic respiration by 46, 37, and 66%, respectively. By contrast, inhibition of aldehyde dehydrogenase with phenethyl isothiocyanate increased the inhibitory effect of ethanol on ureagenic respiration by an additional 60%. AcAld, an intermediate product of ethanol oxidation, suppressed ureagenic respiration with an apparent IC(50) of 125 μM. AcAld also inhibited entry of 3-kDa rhodamine-conjugated dextran in the mitochondrial intermembrane space of digitonin-permeabilized hepatocytes, indicative of VDAC closure. In conclusion, AcAld, derived from ethanol metabolism, suppresses ureagenesis in hepatocytes mediated by closure of VDAC.
In der vorliegenden prospektiven Studie in der neurochirurgischen Klinik an der Johann Wolfgang Goethe-Universität in Frankfurt am Main wurden Oktober 2001 bis August 2006 dreiunddreißig Patienten mit intraduralen Raumforderungen der zervikalen und thorakalen Wirbelsäule unter Betrachtung eines möglichen prädiktiven Wertes der Serumkonzentration des Gliaproteins S100B und des intraoperativen Monitorings untersucht.
Bei jedem Patienten erfolgte das intraoperative Monitoring mittels MEPs und SEPs, außerdem wurde prä- und mehrfach postoperativ die S100B-Serumkonzentration bestimmt. Anschließend wurden die Patienten mindestens 1 Jahr nach dem Eingriff in Bezug auf die noch bestehenden körperlichen Folgen sowie auch die Einschränkungen im alltäglichen Leben und im psychischen Wohlbefinden untersucht.
Der Zusammenhang zwischen dem neurologischen Langzeitoutcome, den Teilergebnissen im intraoperativen Monitoring und im postoperativen S100B-Verlauf zeigte sich deutlich und war statistisch signifikant. Die gemeinsame Betrachtung der Serumkonzentration des Gliaproteins und des IOM unterstrich diese Ergebnisse nochmals, die Spezifität für ein gutes Outcome bei unkompliziertem Monitoring und ausbleibenden Anstieg des S100B lag zum Beispiel bei 100%.
Auch in der Befragung zum alltäglichen Leben anhand des SF-36 zeigte sich ein klarer Zusammenhang zwischen dem klinischen Outcome und den subjektiv aus Patientensicht geschilderten Problemen in der Bewältigung des Alltags. Interessanterweise korrelierte aber die psychische Summenskala des Scores nicht mit dem körperlichen Befund. Die Gruppe des schlechten Outcomes zeigte ein besseres psychisches Wohlbefinden als die Gruppe des guten Outcomes, die aber mit der Normstichprobe vergleichbare Ergebnisse erzielte.
ADAM15 protein amplifies focal adhesion kinase phosphorylation under genotoxic stress conditions
(2012)
ADAM15, a disintegrin and metalloproteinase, is capable of counteracting genotoxic stress-induced apoptosis by the suppression of caspase-3 activation. A cell line expressing the membrane-bound ADAM15 without its cytoplasmic tail, however, lost this anti-apoptotic property, suggesting a crucial role of the intracellular domain as a scaffold for recruitment of survival signal-transducing kinases. Accordingly, an enhanced phosphorylation of FAK at Tyr-397, Tyr-576, and Tyr-861 was detected upon genotoxic stress by camptothecin in ADAM15-transfected T/C28a4 cells, but not in transfectants expressing an ADAM15 mutant without the cytoplasmic tail. Accordingly, a specific binding of the cytoplasmic ADAM15 domain to the C terminus of FAK could be shown by mammalian two-hybrid, pulldown, and far Western studies. In cells expressing full-length ADAM15, a concomitant activation of Src at Tyr-416 was detected upon camptothecin exposure. Cells transfected with a chimeric construct consisting of the extracellular IL-2 receptor α-chain and the cytoplasmic ADAM15 domain were IL-2-stimulated to prove that the ADAM15 tail can transduce a percepted extracellular signal to enhance FAK and Src phosphorylation. Our studies further demonstrate Src binding to FAK but not a direct Src interaction with ADAM15, suggesting FAK as a critical intracellular adaptor for ADAM15-dependent enhancement of FAK/Src activation. Moreover, the apoptosis induction elicited by specific inhibitors (PP2, FAK 14 inhibitor) of FAK/Src signaling was significantly reduced by ADAM15 expression. The newly uncovered counter-regulatory response to genotoxic stress in a chondrocytic survival pathway is potentially also relevant to apoptosis resistance in neoplastic growth.
Die Rolle von NO und cGMP in der Schmerzverarbeitung im Rückenmark ist in den letzten Jahren durch viele Berichte untermauert worden. Nicht vollständig bekannt sind hingegen die Mechanismen, derer sich cGMP bedient, um die Transmission von Schmerzen zu beeinflussen. In der vorliegenden Arbeit wurde deshalb untersucht, welche cGMPabhängigen Phosphodiesterasen (PDEs) hierbei eine Rolle spielen könnten und wie sich diese Beteiligung funktionell äußert. Dazu wurden immunhistochemische Färbungen von Rückenmarkschnitten angefertigt und Western-Blot-Analysen von Rückenmarkgewebe durchgeführt. Beide Methoden lieferten Hinweise dafür, dass die PDEs 1A, 1B, 3A,3B, 5A und 11A keine Rolle in der Verarbeitung von Schmerzen spielen. Demgegenüber scheinen die PDE1C, 2A und 10A in schmerzrelevanten Gebieten des Rückenmarks lokalisiert zu sein. Die funktionelle Relevanz der PDE2A und PDE10A im Rahmen der Schmerzverarbeitung wurde mit Hilfe des PDE2A-Inhibitors BAY 60-7550 und des PDE-10A-Inhibitors Papaverin in nozizeptiven Tiermodellen untersucht. Dabei bewirkte, im Modell der Complete Freund’s Adjuvant (CFA)-induzierten mechanischen Hyperalgesie, die i.p. Applikation von BAY 60-7550 oder Papaverin eine Verstärkung der Hyperalgesie. Weiterhin war die Leckzeit in der 2. Phase des Formalin-Modells bei einer Inhibition von PDE10A signifikant verlängert. Insgesamt bestätigen die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit frühere Berichte, dass cGMP an der Schmerzsensibilisierung im Hinterhorn des Rückenmarks beteiligt ist und deuten auf eine Rolle insbesondere von PDE2A und 10A im Rahmen der Schmerzsensibilisierung hin.
Das Buch ist in vier größere Teile aufgeteilt: Zunächst werden die wichtigsten Entwicklungen in der Frankfurter Universitätsmedizin bis zum Kriegsbeginn verfolgt (Allgemeines, Entrechtungen/Entlassungen, Berufungen, Kliniken und Institute). Anschließend wird die Universitätsmedizin im Krieg beschrieben (Allgemeines, Berufungen, Kliniken und Institute). Schließlich werden separat die schlimmsten Schandtaten und Verbrechen Frankfurter Universitätsmediziner (unter besonderer Berücksichtigung von Berner, Mengele und Hirt) und abschließend die (bescheidenen) oppositionellen Aktivitäten dargelegt
Searching for new strategies to trigger apoptosis in rhabdomyosarcoma (RMS), we investigated the effect of two novel classes of apoptosis-targeting agents, i.e. monoclonal antibodies against TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) receptor 1 (mapatumumab) and TRAIL receptor 2 (lexatumumab) and small-molecule inhibitors of inhibitor of apoptosis (IAP) proteins. Here, we report that IAP inhibitors synergized with lexatumumab, but not with mapatumumab, to reduce cell viability and to induce apoptosis in several RMS cell lines in a highly synergistic manner (combination index <0.1). Cotreatment-induced apoptosis was accompanied by enhanced activation of caspase-8, -9, and -3; loss of mitochondrial membrane potential; and caspase-dependent apoptosis. In addition, IAP inhibitor and lexatumumab cooperated to stimulate the assembly of a cytosolic complex containing RIP1, FADD, and caspase-8. Importantly, knockdown of RIP1 by RNA interference prevented the formation of the RIP1·FADD·caspase-8 complex and inhibited subsequent activation of caspase-8, -9, and -3; loss of mitochondrial membrane potential; and apoptosis upon treatment with IAP inhibitor and lexatumumab. In addition, RIP1 silencing rescued clonogenic survival of cells treated with the combination of lexatumumab and IAP inhibitor, thus underscoring the critical role of RIP1 in cotreatment-induced apoptosis. By comparison, the TNFα-blocking antibody Enbrel had no effect on IAP inhibitor/lexatumumab-induced apoptosis, indicating that an autocrine TNFα loop is dispensable. By demonstrating that IAP inhibitors and lexatumumab synergistically trigger apoptosis in a RIP1-dependent but TNFα-independent manner in RMS cells, our findings substantially advance our understanding of IAP inhibitor-mediated regulation of TRAIL-induced cell death.
Background: The transcription factor T-bet is pivotal for initiation of Th1-related immunoactivation. Identification of novel genes directly regulated by T-bet is crucial.
Results: Genome-wide analysis and subsequent experiments revealed that T-bet up-regulates IL-36γ/IL-1F9 in myeloid cells.
Conclusion: IL-1-related IL-36γ is a direct T-bet target in myeloid cells.
Significance: Observations suggest that IL-36γ , besides IFNγ, contributes to T-bet functions in immunopathology
By concerted action in dendritic (DC) and T cells, T-box expressed in T cells (T-bet, Tbx21) is pivotal for initiation and perpetuation of Th1 immunity. Identification of novel T-bet-regulated genes is crucial for further understanding the biology of this transcription factor. By combining siRNA technology with genome-wide mRNA expression analysis, we sought to identify new T-bet-regulated genes in predendritic KG1 cells activated by IL-18. One gene robustly dependent on T-bet was IL-36γ, a recently described novel IL-1 family member. Promoter analysis revealed a T-bet binding site that, along with a κB site, enables efficient IL-36γ induction. Using knock-out animals, IL-36γ reliance on T-bet was extended to murine DC. IL-36γ expression by human myeloid cells was confirmed using monocyte-derived DC and M1 macrophages. The latter model was employed to substantiate dependence of IL-36γ on endogenous T-bet in human primary cells. Ectopic expression of T-bet likewise mediated IL-36γ production in HaCaT keratinocytes that otherwise lack this transcription factor. Additional experiments furthermore revealed that mature IL-36γ has the capability to establish an inflammatory gene expression profile in human primary keratinocytes that displays enhanced mRNA levels for TNFα, CCL20, S100A7, inducible NOS, and IL-36γ itself. Data presented herein shed further light on involvement of T-bet in innate immunity and suggest that IL-36γ, besides IFNγ, may contribute to functions of this transcription factor in immunopathology.
A simple and fast method of lipid analysis of isolated intact mitochondria by means of MALDI-TOF mass spectrometry is described. Mitochondria isolated from bovine heart and yeast have been employed to set up and validate the new method of lipid analysis. The mitochondrial suspension is directly applied over the target and, after drying, covered by a thin layer of the 9-aminoacridine matrix solution. The lipid profiles acquired with this procedure contain all peaks previously obtained by analyzing the lipid extracts of isolated mitochondria by TLC and/or mass spectrometry. The novel procedure allows the quick, simple, precise, and accurate analysis of membrane lipids, utilizing only a tiny amount of isolated organelle; it has also been tested with intact membranes of the bacterium Paracoccus denitrificans for its evolutionary link to present-day mitochondria. The method is of general validity for the lipid analysis of other cell fractions and isolated organelles.