Open Access

Frank Kramer

• Ziel der vorliegenden Arbeit war es, die Mechanismen aufzuklären, die im Rahmen inflammatorischer Erkrankungen zur Expression sogenannter Akute Phase Proteine führen. Der Fokus lag hierbei auf der Untersuchung von Signaltransduktionkaskaden, die aktiviert durch proinflammatorische Zytokine in der Leber die Bildung proatherogener Plasmaproteine wie C-reaktives Protein zur Folge haben. Zu diesem Zweck sollten verschiedene in vitro Zellmodelle etabliert und evaluiert werden. Neben Genexpressionsanalysen in zytokin-stimulierten primären humanen Hepatozyten, sowie in den Hepatoma-Zellinien HepG2 und Hep3B sollte die Manipulation der CRP-Expression durch gezielten Gentransfer und die Anwendung der siRNA-Technologie im Mittelpunkt dieser Arbeit stehen. Zu diesem Zweck sollten Transkriptionsfaktoren der NFKB-Familie, sowie der Familie der „Signal transducer and activator of transcription“ (STAT) und der CCAAT/Enhancer-bindenden Proteine (C/EBP) überexprimiert werden, bzw. deren Expression durch die Transfektion mit entsprechenden siRNA-Oligonukleotide gehemmt werden. Ein weiteres wichtiges Ziel war es, ein zelluläres Modellsystem zu generieren und zu charakt-erisieren, das zur Identifizierung von Substanzen geeignet ist, die die CRP-Expression modu-lieren oder inhibieren.
• The acute phase response is one of the earliest reactions of the body to inflammatory stimuli. Pro inflammatory cytokines induce known and unknown signal transduction cascades in hepatocytes which transcriptionally regulate expression of acute phase reactants like c-reactive protein (CRP). Trying to unravelling molecular mechanisms controlling hepatic gene expression, global gene expression analysis of cytokine treated primary human hepatocytes (PHH) and different hepatoma cell lines were performed. Furthermore PHH, Hep3B and HepG2 were genetically modified using siRNA and protein overexpression. Using chemical inhibitors the role of several protein kinases in signal transduction of the acute phase response was assessed. Different cellular in-vitro models were established to test potential chemical inhibitors of CRP transcription.