Regulation of matrix-metalloproteinase 9 (MMP-9) in glomerular mesangial cells

  • Remodeling of extracellular matrix (ECM) is an important physiologic feature of normal growth and development. In addition to this critical function in physiology many diseases have been associated with an imbalance of ECM synthesis and degradation. In the kidney, dysregulation of ECM turnover can lead to interstitial fibrosis, and glomerulosclerosis. The major physiologic regulators of ECM degradation in the glomerulus are the large family of zinc-dependent proteases, collectively refered to matrix metalloproteinases (MMPs). The tight regulation of most of these proteases is accomplished by different mechanisms, including the regulation of MMP gene expression, the processing and conversion of the inactive zymogen by other proteases such as serine proteases and finally the inhibition of active MMPs by endogenous inhibitors of MMPs, denoted as tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). Namely, the MMP-9 has been shown to be critically involved in the dysregulation of ECM turnover associated with severe pathologic conditions such as rheumatoid arthritis or fibrosis of lung, skin and kidney. In the present work I searched for a possible modulation of MMP-9 expression and/or activity in glomerular mesangial cells which are thought as key players of many inflammatory and non-inflammatory glomerular diseases. I found that various structurally different PPARalpha agonists such as WY-14,643, LY-171883 and fibrates potently suppress the cytokine-induced MMP-9 expression in renal MC. Furthermore, I demonstrate that the inhibition of MMP-9 expression by PPARalpha agonists was paralleled by a strong increase of cytokine-induced iNOS expression and subsequent NO formation, suggesting that PPARalpha-dependent effects on MMP-9 expression level primarily result from alterations in NO production which in turn reduces the MMP-9 mRNA half-life. Searching for the detailed mechanism of NO-dependent effects on MMP-9 mRNA stability, I found that NO either given from exogenous sources or endogenously produced increases the MMP-9 mRNA degradation by decreasing the expression of the mRNA stabilizing factor HuR. Furthermore, I demonstrate a reduction in the RNA-binding capacity of HuR containing complexes to MMP-9 ARE motifs in cells treated with NO. Since the reduction of HuR expression can be mimicked by the cGMP analog 8-Bromo-cGMP, I suggest that NO reduces in a cGMP-dependent manner the expression of HuR. Finally, I elucidated the modulatory effect of extracellular nucleotides, mainly ATP, on cytokine-triggered MMP-9 expression. Interestingly, I found that in contrast to NO, gamma-S-ATP the stable analog of ATP potently amplifies the IL-beta mediated MMP-9 expression. The increase in mRNA stability was paralleled by an increase in the nuclear-cytosolic shuttling of the mRNA stabilizing factor HuR. Furthermore, I demonstrate an increase in the RNA-binding capacity of HuR containing complexes to the 3'-UTR of MMP-9 by ATP. In summary, the data presented here may help to find new targets (posttranscriptional regulation) that could be used to manipulate or modulate the expression of not only MMP-9 but also other genes regulated on the level of mRNA stability.
  • Umbauprozesse der Extrazellulären Matrix (ECM) spielen eine wichtige Rolle für normale Wachstums- und Entwicklungsprozesse. In der Niere kann der fehlerhafte Umsatz von ECM beispielsweise zur interstitiellen Fibrose und Glomerulosklerose führen. Zu den wichtigsten physiologischen Regulatoren des Abbaus von ECM im Glomerulus zählen die Zink-abhängigen Proteasen, die zur Familie der Matrixmetalloproteasen (MMPs) zusammengefasst werden. In der vorliegenden Arbeit untersuchte ich schwerpunktmässig nach Möglichkeiten die MMP-9 Expression und/oder MMP-Aktivität in glomerulären Mesangiumzellen zu verändern. Mesangiumzellen gelten als Hauptakteure von glomerulären Erkrankungen mit entzündlichen- als auch nicht entzündlichen Genese. Wie ich gezeigt habe, sind unterschiedliche PPARalpha Agonisten wie beispielsweise WY-14,643, LY-171883 und Fibrate in der Lage, die Zytokin-induzierte MMP-9 Expression in Mesangiumzellen potent zu hemmen. Weiterhin konnte von mir gezeigt werden, dass die Hemmung der MMP-9 Expression durch PPARalpha Aktivatoren mit einer Steigerung der iNOS Expression und der unmittelbaren Steigerung der NO Freisetzung einhergeht. Interessanterweise konvertieren die hemmenden Effekte der PPARalpha Aktivatoren in der Gegenwart eines iNOS Hemmstoffes zu einer massiven Verstärkung der Zytokin-induzierten MMP-9 Expression was darauf hinweist, dass die PPARalpha-vermittelten Effekte in erster Linie durch Veränderungen der NO Synthese hervorgerufen werden. Auf der Suche nach dem Mechanismus der NO-vermittelten Effekte auf die MMP-9 Expression konnte ich zeigen, dass sowohl exogen zugeführtes NO als auch über eine Induktion der iNOS entstandenes NO, in der Lage ist, den Abbau von MMP-9 mRNA durch eine Expressionshemmung des mRNA Stabilitätsfaktor HuR zu beschleunigen. In einem weiteren Projekt untersuchte ich, ob extrazellulären Nukleotide in der Lage sind, einen modulierenden Einfluss auf die Zytokin-induzierte MMP-9 Expression auszuüben. Ich konnte zeigen, dass das chemisch stabilisierte ATP-Analog gamma-S ATP im Unterschied zu NO in der Lage ist, den IL- 1beta vermittelten Anstieg der MMP-9 in potenter Weise zu verstärken. Der Anstieg der mRNA Stabilität korreliert mit einer Zunahme des Transports von HuR aus dem Zellkern in das Zytoplasma. Der verstärkte Export von HuR aus dem Zellkern war verbunden mit der verstärkten RNA Bindungsaffinität von HuR-haltigen Komplexen an AU-reiche Sequenzen innerhalb des 3'-untranslatierten Bereichs (3'-UTRs) des MMP-9 Gens. Zusammenfassend könnten die vorliegende Arbeit helfen, neue (posttranskriptionellen) Ansätzen zu finden, die eine spezifische Manipulation von MMP-9 und anderen auf Ebene der mRNA Stabilität regulierten Genen, ermöglichen.

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Metadaten
Author:El-Sayed Akool
URN:urn:nbn:de:hebis:30-0000004196
Referee:Josef Martin PfeilschifterGND
Document Type:Doctoral Thesis
Language:English
Date of Publication (online):2004/06/30
Year of first Publication:2003
Publishing Institution:Universitätsbibliothek Johann Christian Senckenberg
Granting Institution:Johann Wolfgang Goethe-Universität
Date of final exam:2004/03/31
Release Date:2004/06/30
HeBIS-PPN:12208893X
Institutes:Biochemie, Chemie und Pharmazie / Pharmazie
Dewey Decimal Classification:6 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften / 61 Medizin und Gesundheit / 610 Medizin und Gesundheit
Licence (German):License LogoDeutsches Urheberrecht